[发明专利]由多能干细胞向体细胞的分化诱导方法

权利要求书

1.一种分化诱导方法，其特征在于，在使用包含肝素结合生长因子的培养基将多能干细胞分化诱导为体细胞的方法中，使层粘连蛋白E8片段与包含硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的生长因子结合位点的片段连结而成的偶联物与细胞接触。

2.根据权利要求1所述的分化诱导方法，其中，所述包含硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的生长因子结合位点的片段为包含串珠蛋白聚糖的结构域1的片段。

3.根据权利要求1或2所述的分化诱导方法，其中，所述偶联物为在层粘连蛋白E8片段的α链的C末端连结有包含硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的生长因子结合位点的片段的偶联物。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的分化诱导方法，其特征在于，使用涂覆有所述偶联物的细胞培养容器将多能干细胞分化诱导为体细胞。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的分化诱导方法，其中，肝素结合生长因子为选自骨形成蛋白2、骨形成蛋白4、骨形成蛋白7、碱性成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子4、成纤维细胞生长因子8、成纤维细胞生长因子10、肝细胞生长因子、血小板源性生长因子BB、Wnt3a蛋白、音猬因子、血管内皮细胞生长因子、转化生长因子β、激活素A、抑瘤素M、角化细胞生长因子及胶质细胞源性神经营养因子中的一种以上。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的分化诱导方法，其中，多能干细胞为人iPS细胞。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的分化诱导方法，其中，所述体细胞为中胚层来源的体细胞。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的分化诱导方法，其特征在于，在使用包含骨形成蛋白4或激活素A的培养基将人iPS细胞分化诱导为心肌细胞的方法中，通过使在人层粘连蛋白α4β2γ1E8片段的α链的C末端或人层粘连蛋白α5β1γ1E8片段的α链的C末端连结有串珠蛋白聚糖的结构域1的偶联物与细胞接触从而进行分化诱导。

9.根据权利要求1～7中任一项所述的分化诱导方法，其特征在于，在使用包含碱性成纤维细胞生长因子及肝细胞生长因子的培养基将人iPS细胞分化诱导为骨骼肌细胞的方法中，通过使在人层粘连蛋白α4β2γ1E8片段的α链的C末端、人层粘连蛋白α5β1γ1E8片段的α链的C末端、人层粘连蛋白α4β1γ1E8片段的α链的C末端或人层粘连蛋白α5β2γ1E8片段的α链的C末端连结有串珠蛋白聚糖的结构域1的偶联物与细胞接触从而进行分化诱导。

10.根据权利要求1～7中任一项所述的分化诱导方法，其特征在于，在使用包含血管内皮细胞生长因子的培养基将人iPS细胞分化诱导为血管内皮细胞的方法中，通过使在人层粘连蛋白α4β1γ1E8片段的α链的C末端连结有串珠蛋白聚糖的结构域1的偶联物与细胞接触从而进行分化诱导。