[发明专利]检测慢病毒的方法

权利要求书

1.一种在具有人类免疫缺陷病毒(HIV)的受试者或怀疑患有HIV感染(AIDS)的受试者中检测HIV的方法，所述方法包括对从所述受试者获得的生物样品中的R区域核酸进行PCR扩增，其中所述扩增包括与位于HIV的长末端重复(LTR)的R区域内的序列杂交的正向引物和反向引物，和随后检测任何扩增，其中检测到扩增表明所述受试者中存在HIV。

2.根据权利要求1所述的方法，其中检测扩增用被标记的寡核苷酸探针来执行，所述被标记的寡核苷酸探针与被扩增的R区域序列内的序列杂交。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述核酸是DNA或逆转录RNA(cDNA)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述HIV是HIV-1或HIV-2。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述PCR是实时PCR。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述PCR是终点PCR。

7.一种用于定量来自具有HIV的受试者或怀疑患有HIV感染的受试者的生物样品中的HIV DNA拷贝数的方法，所述方法包括:

(i)根据权利要求1所述扩增和检测HIV-R区域序列；和

(ii)通过参考相应的HIV质粒标准物对被扩增的HIV-R区域序列进行定量，以获得每体积样品的HIV DNA拷贝数。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述扩增是实时PCR或终点PCR。

9.根据权利要求7或8所述的方法，还包括针对DNA标准物来归一化HIV DNA拷贝数，以获得生物样品中每一个或更多个细胞的HIV DNA拷贝数。

10.一种通过针对标准物归一化来定量来自具有HIV的受试者或怀疑患有HIV感染的受试者的生物样品中的HIV DNA拷贝数的方法，所述方法包括:

(i)根据权利要求1至6中任一项所述扩增和检测HIV-R区域序列；

(ii)通过参考相应的HIV标准物，经由定量PCR来定量所述样品中每体积DNA的HIV-R区域的拷贝数；

(iii)使用相应的管家标准物通过定量PCR来定量内源性管家基因，以获得所述内源性基因的拷贝数，所述内源性基因的拷贝数表示为样品中存在的每体积DNA的管家基因拷贝数；

(iv)将获得的拷贝数除以细胞中内源性基因的拷贝数，以得出所述样品中每体积DNA的细胞数；和

(v)通过将(i)中获得的值除以(iii)中获得的值来计算每个细胞的HIV-R区域DNA拷贝数，从而归一化HIV DNA拷贝数，以获得所述生物样品中的HIV-R区域DNA拷贝数(拷贝数/细胞)。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述DNA标准物是肌动蛋白。

12.一种用于定量来自具有HIV的受试者或怀疑患有HIV感染的受试者的生物样品中的HIV DNA拷贝数的方法，所述方法包括:

(i)根据权利要求1-6中任一项所述扩增和检测HIV-R区域序列；

(ii)通过测量所述样品中DNA的吸光度来定量所述样品中每体积的DNA质量(w/v)；

(iii)基于DNA吸光度计算所述样品中每体积DNA的细胞数；和

(v)通过将(ii)中获得的值除以(iv)中获得的值来计算每个细胞的HIV-R区域DNA拷贝数，从而归一化HIV DNA拷贝数，以获得所述生物样品中的HIV-R区域DNA拷贝数(拷贝数/细胞)。

13.根据权利要求12所述的方法，其中定量所述样品中每体积的DNA质量包括DNA嵌入染料和测量所述染料发出的荧光。