[发明专利]用于毛细血管中血小板计数的方法和装置

说明书

一种测定毛细血管血样中血小板计数的方法，包括步骤：提供在样本采集时用EDTA进行抗凝处理的毛细血管血样；在有效减少血小板聚集的量的EDTA存在下，在非溶解性缓冲液中以1:10至1:2000的稀释系数稀释所述样本；将稀释的样本孵育至少23秒；任选地，在测定来自所述孵育样本的血小板计数之前，在第二稀释步骤中稀释所述孵育样本；并从所述孵育样本中测定血小板计数。该方法在集成设备中执行。一种用于执行该方法的设备。

技术领域

本发明涉及使用自动化装置分析毛细血管血液样本的领域，特别涉及从这些样本中测定血小板计数。

背景技术

用于在快速检测环境中从毛细血管血液样本确定血细胞计数的方法和装置是众所周知的。在典型的情况下，将小样本(微升)的毛细血管血液(与静脉血液相反)吸入涂有抗凝血剂(通常为EDTA)的薄玻璃毛细管中。然后将带有血液样本的玻璃毛细管置于自动装置中，该自动装置执行在等渗盐水缓冲液中的稀释，然后测定细胞计数，例如红细胞、各种类型的白细胞和血小板(thrombocytes)(也称为血小板(platelets))。

在本技术领域中，公认的问题是，当使用自动化集成仪器来通过毛细血管血液样本确定患者的血小板计数时，与使用在同一时间点来自同一患者的静脉样本获得的计数相比，其结果通常是错误性的偏低。该问题源于血小板聚集的趋势，尽管使用涂在毛细血管壁上的强力抗凝剂如EDTA。在US8,927,228中描述了该问题的建议解决方案，其中发明人已经发现向样本中加入氯喹盐缓解了聚集的问题。

一个明显单独的并非是本发明目的的问题是，EDTA依赖性假性血小板减少症(PTCP)，一些患者中由于EDTA诱导的血小板聚集导致的假低血小板计数的罕见现象，可以得到解决，例如，用卡那霉素。与静脉样本相比，不寻常的PTCP现象不同于毛细血管血液样本计数较少的一般情况。

然而，本领域仍然需要提供用于使用集成的自动化装置从毛细血管血液中确定血小板的替代和/或改进的方法和装置，特别是不需要使用额外的试剂并且实施成本有效。

定义

术语EDTA是指乙二胺四乙酸，一种结合钙和其他二价金属阳离子的螯合剂。

术语血小板(thrombocyte)和血小板(platelet)可互换使用。

术语毛细血管血液是指来自受试者毛细血管的血液样本，通常是手指的穿刺/针刺。毛细血管血液与静脉血液不同，静脉血液通过从静脉取样以及从动脉取样的动脉血液来定义。除了来源之外，毛细血管血液和静脉血液的采样方法也不同，这导致每个类别的样本具有不同的特性。

术语MPA是指为Medonic M系列M32仪器和Swelab Alfa Plus仪器设计和使用的适配器设备。它旨在接收并稀释包含在两端开口的毛细管中的少量限定体积的血液样本。该技术描述于US6284548B1中。

附图说明

图1：典型的自动血小板计数程序的流程图，例如Medonic M系列M32M和SwelabAlfa Plus标准中使用的程序。椭圆形象征着手动处理样本。矩形由单元计数器自动处理。取样：通过毛细管作用将20μL血液采集到毛细管(微量移液管)中。转移：将样本放入MPA设备内。稀释1：通过用稀释剂冲洗将样本移至混合杯中，从而产生第一稀释液(约4秒)。等待1：在混合杯中等待混合物变得均匀(标准方案中约10秒)。正是在这种情况下，增加了额外的时间来稳定PLT结果。转移1：将第一稀释液移至所谓的剪切阀，该剪切阀分离20μL的该稀释液(约3秒)。稀释2：通过用稀释剂冲洗将样本移至计数室，从而产生第二稀释液(约4秒)。等待2：在计数室中，等待混合物变得均匀(约7秒)。计数：对样本中的细胞进行计数并通过库尔特原理(约13秒)进行分类。

图2：显示使用标准方法的毛细血管血液中血小板计数与静脉血液分析相比的相对差异的大型临床研究。