[发明专利]多级色谱分析方法及分析系统

说明书

本发明的目的是提供针对包含光学异构体的试样的更准确的分析方法和系统。其特征在于，参照色谱的结果，在从开始从基线隆起的时刻到回归基线的结束时刻为止，将达到与对应于其它的1个或多个成分的色谱峰的完全分离的流分分别依次分取，在未达到对单一成分完全分离的情况下，将分取流分进一步供于色谱，在达到完全分离的情况下，将分取流分供于手性色谱。

技术领域

本发明涉及采用色谱法对试样中的多个成分的光学异构体进行分析的分析方法、以及执行该分析方法的分析系统。

背景技术

色谱法是使用导入到分析系统内的流动相、和被保持于柱等的固定相，在分析系统内与流动相一起导入包含多个成分的试样，利用流动相内的各成分与固定相的物理、化学相互作用的差别而将多个成分进行分离、检测的方法。

然而，如果要对物理、化学性质近似的多个成分进行分析，则在没有通过与固定相的相互作用而被充分分离的情况下进行溶出，色谱峰会发生重叠。其结果，对于单一分离系统，有时不能将试样所包含的多个成分精密分离。

因此，广泛采用了将通过色谱仪进行了分离、分级的成分进一步通过包含其它流动相和固定相的另一个色谱仪进行分离的分析方法。以下，将其称为2级色谱分析方法。

作为2级色谱分析方法，一般而言，分取通过第1级色谱仪分离出的包含目标成分的色谱峰流分，导入到第2级色谱将目标成分精密分离。在该情况下，有在串联的装置中切换柱的方法(在线柱转换法)、和在分析系统外暂时分取流分并导入到其它装置系统的方法(离线柱转换法)。

这些方法中，在一个分析系列中仅可以对一个目标成分进行分离，因此在以多个成分作为对象的情况下必须根据其数量而增加分析系列、分析次数，目标成分数越多则越需要劳力和时间。此外，对于如生物体试样那样量受限的试样，分析次数也产生限度，存在不能对全部目标成分进行分析的状况。

为了解决这样的问题，开发了将2个柱、与分别保持被分离出的流分的多回路组合，能够同时·一起·自动进行多个成分的分析的2级液相色谱方法以及系统(专利文献1)。此外开发了将在通过第1级的色谱而分离出的各成分的峰的从开始从基线隆起的时刻到回归基线的结束时刻为止期间的时间被分级的成分向保持部逐次分取，将分取完成的成分供于第2级的色谱分析的液相色谱系统(专利文献2)。

这里，专利文献1和2意图是将通过1级的色谱难以分离的光学异构体通过第2级的色谱进行分离。专利文献2中，虽然公开了将在各成分的峰的从开始从基线隆起的时刻到回归基线的结束时刻为止期间被分级的成分向保持部逐次分取，但是其前提是分析目标的各成分与光学异构体以外的成分相互不具有峰的重叠。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4291628号公报

专利文献2：日本专利第4980740号公报

专利文献3：日本特开2015-48332号公报

发明内容

发明所要解决的课题

通过以往的2级色谱，能够将多个成分的光学异构体分离进行定量。然而，本发明人等发现下述课题：例如如生物体中的试样中包含的氨基酸那样，存在大量复杂的基质成分，并且在一种光学异构体与其它光学异构体相比存在量大不相同的情况下、由温度等条件差异引起的略微的保留时间的波动等而产生的色谱峰的重叠有时会引起相对少的光学异构体的测定值发生变动。

用于解决课题的方法