[发明专利]用于递送核酸佐剂的细菌小细胞和使用其的方法

说明书

本公开内容提供了包含核酸佐剂或编码核酸佐剂的质粒的完整的细菌衍生的小细胞，其可以产生靶细胞中期望的免疫应答。本公开内容进一步提供了采用小细胞来递送核酸佐剂用于治疗疾病的方法，疾病包括赘生性疾病和癌症。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年10月6日提交的美国临时专利申请号62/405,074的优先权。该申请的内容通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本公开内容一般地涉及基于核酸的疗法领域，并且具体地涉及使用细菌衍生的、完整小细胞将核酸佐剂向哺乳动物靶细胞(例如，T细胞、树突细胞)的递送。本公开内容对于治疗癌症——尤其是在促进抗肿瘤免疫应答的背景中——和感染(例如，病毒感染)具有特别的实用性。

背景技术

仅提供以下讨论以帮助读者理解本公开内容，并且不承认描述或构成其现有技术。

最近的进展已经鉴定了由哺乳动物细胞中的受体感知的许多核酸。核酸受体的参与以多种方式激活先天免疫系统。例如，某些核酸(即，核酸佐剂)与同源受体的结合导致触发1型和II型干扰素(IFN)。这些干扰素可以用作增强免疫系统的抗肿瘤活性的佐剂(在Junt和Barchet，2015中综述)。

除了触发细胞内在的和IFN介导的效应机理之外，核酸感受器激动剂可以激活树突细胞(DC)，促进细胞因子分泌、成熟和抗原呈递。这又增强和塑造了适应性免疫应答的质量。由于它们的免疫增强特性，在临床试验中正在使用寡核苷酸或核酸感受器的小分子激动剂来增强针对免疫原性差的癌症的免疫应答，以及作为针对癌症的治疗性免疫或针对感染的预防性疫苗的佐剂。

已经发现核酸感受器的许多激动剂，并作为佐剂测试以激发抗病毒免疫力或增强抗肿瘤活性。尽管核酸感受器的这些激动剂有希望作为佐剂，但事实上有很少进入临床开发。

这可能是由于几个因素造成的。具体而言，核酸激动剂需要被递送到特定细胞比如树突细胞中，但是这些分子不具有帮助定位或进入靶细胞的寻靶特性(homingproperty)。另外，当在体内施用时，游离核酸在血清中是不稳定的并且可以被核酸酶快速降解。结果，核酸佐剂和核酸感受器的激动剂已经降级为局部使用，或必须与蛋白质抗原共价连接。

因此，本领域明确需要能够将核酸感受器的治疗性核酸佐剂和激动剂递送至靶细胞的递送系统。本公开内容提供了这样的递送系统。

发明内容

本文描述了使用包括核酸佐剂或核酸感受器的激动剂的细菌衍生的、完整小细胞治疗疾病的组合物和方法。一般而言，公开的小细胞递送载体通过将核酸佐剂或核酸感受器的激动剂转运到靶细胞，比如T细胞或树突细胞来起作用，以引起帮助对抗包括癌症和/或感染的各种疾病的免疫应答。

在一个方面中，本公开内容提供了组合物，该组合物包括(a)完整小细胞，该完整小细胞包括至少一种核酸佐剂分子、包括编码至少一种核酸佐剂分子的区段的质粒或核酸感受器的激动剂，和(b)药学上可接受的载体，因此其中至少一种核酸佐剂分子或核酸受体的激动剂触发来自靶细胞的免疫应答。

在另一方面中，本公开内容提供了将核酸佐剂或核酸感受器的激动剂递送到靶细胞的方法，该方法包括使靶细胞与完整小细胞接触，该完整小细胞包括(i)至少一种核酸佐剂分子，(ii)由编码至少一种核酸佐剂分子的区段组成的质粒，或(iii)核酸感受器的至少一种激动剂，其中靶细胞吞噬小细胞。

在又另一方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的疾病的方法，该方法包括向患有疾病的受试者施用完整小细胞，该完整小细胞包括(i)至少一种核酸佐剂分子，(ii)包括编码至少一种核酸佐剂分子的区段的质粒，或(iii)核酸受体的至少一种激动剂，其中小细胞在施用之后被靶细胞吞噬。

在一些实施方式中，靶细胞中产生的免疫应答包括I型干扰素的产生，包括干扰素-α和/或干扰素-β。