[发明专利]用于癌症干细胞(CSC)扩增的方法

权利要求书

1.一种用于扩增癌症干细胞(CSC)的方法，包括：

a)在体外细胞培养物中的三维支架上，生长类肿瘤；以及

b)从所述类肿瘤中分离出CSC。

2.一种用于扩增癌症干细胞(CSC)的方法，包括：

a)在包含三维支架的体外细胞培养物中，生长癌细胞；

b)在所述支架上，从所述癌细胞生长类肿瘤；

c)从所述类肿瘤中，收获癌细胞(类肿瘤癌细胞)；

d)将所述类肿瘤癌细胞，转移到包括三维支架的新的体外细胞培养物中；

e)在所述新的体外细胞培养物的所述支架上，从所述类肿瘤癌细胞生长下一代类肿瘤。

3.如权利要求2所述的方法，其中将步骤c)至步骤e)重复至少一次。

4.如权利要求2所述的方法，其中将所述步骤c)至步骤e)重复至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次或至少七次。

5.如权利要求2～4中任一项所述的方法，包括：从所述类肿瘤中分离出CSC。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中所述方法包括：将所述类肿瘤解离成单个细胞，或小于1000、500、100、50或10个细胞的类肿瘤细胞碎片。

7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其中所述方法包括：从所述类肿瘤，形成类肿瘤癌细胞的单细胞悬浮液。

8.如权利要求1或5～7中任一项所述的方法，其中所述从所述类肿瘤中分离出CSC包括：从所述类肿瘤形成类肿瘤癌细胞的单细胞悬浮液；以及，从所述类肿瘤癌细胞的单细胞悬浮液中分离出CSC。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括：从人癌细胞生长类肿瘤。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述人癌细胞来自人活检物。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述支架包含聚乳酸(PLA)与单甲氧基聚乙二醇(mPEG)的嵌段共聚物和聚(乳酸-共-羟基乙酸)(PLGA)的静电纺丝混合物。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述类肿瘤生长在低氧条件或模拟低氧条件的条件下，所述低氧条件或模拟低氧条件遍及所述细胞培养物或局部于所述支架。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞培养物或所述支架进一步包含氯化钴(CoCl₂)。

14.如权利要求13所述的方法，其中在静电纺丝之前，将所述CoCl₂添加到聚乳酸(PLA)与单甲氧基聚乙二醇(mPEG)的嵌段共聚物和聚(乳酸-共-羟基乙酸)(PLGA)的混合物中。

15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述类肿瘤培养在培养基中，该培养基包括条件培养基(CM)，所述条件培养基(CM)收集自：原代人癌相关的成纤维细胞(CAF)和/或来自人外周血的髓源抑制性细胞(MDSC)。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述类肿瘤培养在包含基于ECM的水凝胶的培养基中。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述基于ECM的水凝胶是从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤提取的、溶解的基底膜制剂。

18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与用于生长第一代类肿瘤的癌细胞相比，所述第一代类肿瘤的CSC增加了至少2倍、2.5倍或3倍。