[发明专利]用于定量免疫组织化学的方法和系统

说明书

提供了用于靶蛋白分子(包括分泌的靶蛋白分子)的定量免疫组织化学(IHC)的方法和系统。该方法包含对样品引入:对该靶蛋白分子特异性的一级抗体；与二级抗体酶缀合的二级抗体,该二级抗体是对该一级抗体特异性的；与酪胺半抗原缀合的酪胺,其中该二级抗体酶催化该酪胺半抗原沉积至该样品上；与三级抗体酶缀合的三级抗体,该三级抗体是对该酪胺半抗原特异性的；和生色团,其中该三级抗体酶催化与该生色团的反应以使得该生色团可见。该生色团是使用显微术作为点状点可见的。

发明领域

本发明涉及免疫组织化学技术,更加具体地,用于定量免疫组织化学的方法和系统。

发明背景

预后性和/或预测性蛋白质生物标志物的自动化检测中使用的当前技术依赖于阈数目的生物标志物分子(例如大于1个,1,000个,10,000个,等)来产生可见信号。因而,产生可见信号需要的蛋白质生物标志物分子的数目取决于所使用的检测技术的特征,主要是灵敏度和特异性。如此,当前技术不能检测或量化独个蛋白质分子。结果是,几乎所有已建立的预后性和/或预测性蛋白质生物标志物的临床评估限于使用二元分析:加与减,反映信号的存在或缺失。

本发明特征在于放大信号的方法。本发明有助于降低产生可见信号需要的分子的阈数目。令人惊讶地,如预期的,本发明的方法具有足够的特异性以产生点状点,与弥漫的信号或团迹形成对比。可以对点状点计数。在某些实施方案中,本发明的方法可应用于分泌的蛋白质。

在某些实施方案中,本发明可用于定量免疫组织化学的方法,其中点状点可代表独个靶分子且可计数。在某些实施方案中,本发明能够检测和分析分泌的蛋白质因子(或其它适宜的分泌因子,不限于蛋白质),而当前的技术并不对自细胞分泌的蛋白质产生可解读的信号。这些量化是经由产生点状点信号的放大系统和生色团的增加而实现的。

不希望将本发明限于任何理论或机制,认为靶分子的信号和表达水平的量化可帮助为患者提供与产生二元(加或减)结果的传统方法相比另外的预后价值和/或预测价值。

本发明还容许多种靶分子的多路化信号,例如使用具有窄吸收光谱的可分解染料。

发明概述

本发明特征在于用于定量免疫组织化学的方法和系统。例如,本发明利用能够产生点状点信号的一种高灵敏度放大系统(例如酪胺-DIG,酪胺-NP)和特定生色团。

在某些实施方案中,本发明提供一种用于检测结合至独个靶蛋白生物标志物的独个分子(例如抗体)的技术。点状点信号的产生帮助实现靶蛋白生物标志物(例如蛋白质或其它靶分子,包括分泌的靶蛋白生物标志物)的检测,分析,和量化。

本发明提供用于放大样品中的靶分子的信号的方法(例如用于放大福尔马林固定,石蜡包埋(FFPE)组织样品中的靶分子的信号的方法)。方法可包含用去石蜡化试剂处理组织样品并用抗原修复试剂处理组织样品。方法可进一步包含用蛋白酶处理样品,例如在应用对靶蛋白生物标志物特异性的生物标志物特异性药剂之前。

在一些实施方案中,方法包含对样品应用:对靶蛋白生物标志物特异性的生物标志物特异性药剂；对生物标志物特异性药剂特异性的第二结合剂,其中第二结合剂是与二级酶缀合的；包含与酪胺半抗原缀合的酪胺分子的酪胺剂,其中二级酶催化酪胺半抗原沉积至样品上(例如在第二结合剂的位置处)；对酪胺半抗原特异性的第三结合剂,其中第三结合剂是与三级酶缀合的；和可检测模块(例如生色团),其中三级酶催化与可检测模块(例如生色团)的反应以使得可检测模块(例如生色团)可见。可检测模块(例如生色团)可以是使用显微术(例如明视野显微术)作为点状点可见的。点状点可指示独个靶分子。