[发明专利]稳定聚合物形式的新型重组蛋白UK 114用于治疗、诊断和预防恶性实体和全身性肿瘤

说明书

公开了一种稳定聚合物形式的新型重组蛋白UK114，用于治疗、诊断和预防恶性实体和全身肿瘤。

本发明涉及稳定聚合物形式的重组YjgF/YER057c/UK114 RID蛋白(YjgF/YER057c/UK114)，用于治疗、诊断和预防恶性实体和全身肿瘤。

现有技术

称为YjgF/YERO57c/UK114的蛋白质家族在各种原核生物和真核生物中高度保守，已经形成了旨在调查所述蛋白质的结构和功能特征的许多研究的主题(Bartorelli等人，J.Tumor和Marker Oncology，1994,9,37；LambrechtJA等人，J.Biol.Chem.，2010,285,34401-34407；Lambrecht JA等人，J.Biol.Chem.，2012,287,3454-3461；MistinieneE等人，Bioconjugate Chem.2003,14,1243-1252；DhawanL等人，Mol.Cell.Biol.，2012,32,3768-3775；Flynn JM等人，Mol.Microbiol.，2013，89(4)751-759；Ernst DC等人，J.Bacteriology，2014,196(18)，3335-3342；Niehaus TD等人，BMC Genomics，2015,16,382)。UK114属于YjgF/YER057c/UK 114家族。该家族成员的共同点是它们的生物活性，尤其是2-氨基丙烯酸的脱氨酶活性(参见Lambrect等人，2012)。所述活性定义YjgF/YER057c/UK114家族的所有成员，其首字母缩写为RID。

WO 9602567描述了含有蛋白质UK 114的高氯酸可溶性山羊肝脏提取物(称为UK101)的抗肿瘤活性。所述蛋白质具有14.2kDa的分子量和137个氨基酸的序列，如CecilianiF.等人，FEBS Letters，1996,393,147-150所报道的。

从与其交叉反应的各种物种和/或蛋白质中分离的天然蛋白质UK114仅存在于正常细胞的细胞质中，而其各种百分比也存在于恶性实体全身性肿瘤细胞的细胞膜中(Bartorelli A，等人，Int J Oncol.1996 Mar；8(3)：543-8.；BussolatiG等人，Int JOncol.1997 Apr；10(4)：779-85)。在腺癌中，它在超过80％的肿瘤中表达。重组形式的蛋白质UK 114的大肠杆菌表达描述于WO 0063368和Colombo I等人(Biochim.Biophys.Acta，1998,1442,49-59)和Burman JD等人，(BMCStructural Biology，2007,7,30)，但是，与报道二聚体结构的WO 0063368不同，Deriu D等人(ActaCryst.，2003，D59,1676-1678)报道了结晶形式的蛋白质UK 114具有三聚体构型。从文献中已知具有单体结构的蛋白质UK114(Oka等人，1995 J.Biol.Chem.270：30060-30067)可以以不稳定的二聚体或三聚体形式存在。在实验上，各种物理化学条件，尤其是各种离子和蛋白质变性浓度，可以使二聚体或三聚体蛋白质UK114呈现单体构象，如色谱和质谱分析所证明的。根据Mistiniene等人的研究，重组蛋白UK114(从大肠杆菌获得)在由KCl 3M或3M盐酸胍诱导的轻微变性的条件下以单体形式出现，而在0.1M NaCl溶液中，它是三聚体形式。这种结果的可变性是由于三聚体在各种不稳定条件下解离成单体的趋势。

在任何情况下，没有描述被认为是三聚体的形式的免疫原性活性，而申请人进行的研究表明，当注射到异种哺乳动物中时，从单体大肠杆菌获得的重组蛋白不产生任何抗体反应。Colombo I.等人(Biochim.Biophys.Acta，1998,1442,49-59)和WO 00/63368中公开的重组蛋白质(描述为二聚体和/或三聚体)实际上在还原和非还原条件下都快速分解成单体，因此不能诱导抗体反应。