[发明专利]用作疫苗的表达外泌体锚定蛋白的核苷酸序列

说明书

本发明涉及用作疫苗的表达融合蛋白的核苷酸序列或包含所述核苷酸序列的DNA表达载体，所述融合蛋白包含在C‑末端与抗原融合的外泌体锚定蛋白、或由其组成。

技术领域

本发明涉及用作疫苗的表达外泌体(exosome)锚定蛋白的核苷酸序列。特别地，本发明涉及用作疫苗的表达融合蛋白的核苷酸序列或包含所述核苷酸序列的DNA表达载体，所述融合蛋白包含在C-末端与抗原融合的外泌体锚定蛋白、或由其组成。

背景技术

已知免疫反应可以提供对外部和内部健康威胁的保护。在许多情况下，当天然免疫不能抑制病理的发展时，通过接种免疫原引起的免疫反应可以阻断病理过程，例如通过诱导针对几种感染性病原体的中和抗体来进行。

不同的是，基于CTL的疫苗的鉴定、生产和销售受到更多限制，尽管普遍认为其对于对抗慢性感染和肿瘤疾病的发展具有潜在的用途。

引发强烈和广泛的CTL免疫反应预期对于几种病症的治疗具有治疗意义。例如，几个证据表明，细胞介导的免疫反应在控制HPV感染并且因此在控制病毒相关的瘤形成中起着重要作用。事实上，无论是一般的免疫抑制还是不良的抗HPV CTL反应，都与病毒持续性和疾病进展相关。

用于诱导抗原特异性CTL免疫的最常用的实验技术是基于病毒载体、肽和灭活病原体的使用。然而，迄今为止，市场上还没有CTL免疫原性药物。

用于产生免疫原性蛋白的DNA疫苗接种认为是成功的。例如，一种针对日本脑炎的DNA疫苗已于2010年发布供人类使用(1)。此外，已批准用于保护马免于西尼罗河病毒影响的兽用DNA疫苗(2，3)。此外，据报道，针对多发性硬化的DNA疫苗接种的初步研究是有效的(4)。总而言之，这些证据支持这样的观点，即原则上，DNA疫苗接种可以具有在人类中应用的前景。在DNA疫苗接种的优点中，应该提到的是研发和生产的简易性、储存稳定性、成本效益和免疫原的持久性。理论上的缺点表现为可能产生抗DNA抗体，以及对细胞生长的遗传控制的机制的干扰。然而，主要的限制表现为诱发免疫反应的效力不足。出于这个原因，许多疫苗接种方案(包括为了引发免疫反应使用DNA)继之在替代配方的免疫原接种以增强免疫。

外泌体是所有细胞类型组成性地释放的50-100纳米的囊泡。它们由内体膜的向内内陷产生。这些管腔内的囊泡形成可以运输至质膜的多泡体(VB)，它们与质膜融合，从而释放它们的囊泡内容物至胞外环境中。已经在肌细胞中描述了显示出类似于外泌体的物理和生物化学特征，但是通过质膜的直接挤出产生的纳米囊泡(5，6)。尽管之前认为外泌体专门用于分泌废细胞材料，但现在已经认识到外泌体是细胞间通信网络的部分。它们包括了可在靶细胞中起作用的信使RNA、微RNA、DNA和蛋白质。

它们的免疫原性基本上是它们并入的抗原的数量和质量的结果。外泌体作为抗肿瘤免疫刺激剂进行了研究，并且在一些情况下它们获得了临床试验的批准(7-9)。自发地上载肿瘤抗原(主要是跨膜蛋白，如gp100、TRP-1、Her2/neu和CEA)的外泌体已经发现诱导特异性抗肿瘤T细胞免疫的激活(10，11)。临床试验证明了外泌体在肿瘤患者中作为无细胞疫苗的可行性和良好耐受性。然而，它们的治疗效果似乎非常有限，因此需要新的方法来提高其免疫原性。这个问题通过工程化外来抗原以增加它们在外泌体膜上的展示来解决。在这个方面，到目前为止已经描述了两种策略。第一种策略是利用乳粘素的C1C2结构域与外泌体脂质的结合，导致异源抗原与外泌体膜的外侧结合。另一种策略依赖于用具有高度疏水的跨膜结构域尾的金黄色葡萄球菌肠毒素A包被外泌体为。