[发明专利]D-阿洛酮糖的酶法生产

权利要求书

1.一种用于制备阿洛酮糖的方法，所述方法包括：

由差向异构酶催化将果糖6-磷酸(F6P)转化为阿洛酮糖6-磷酸(A6P)；和

由磷酸酶催化将所述A6P转化为阿洛酮糖。

2.如权利要求1所述的方法，其还包括将葡萄糖-6-磷酸(G6P)转化为所述F6P的步骤，其中所述步骤由磷酸葡萄糖异构酶(PGI)催化。

3.如权利要求2所述的方法，其还包括将葡萄糖1-磷酸(G1P)转化为所述G6P的步骤，其中所述步骤由磷酸葡萄糖变位酶(PGM)催化。

4.如权利要求3所述的方法，其还包括将糖类转化为所述G1P的步骤，其中所述步骤由至少一种酶催化，其中所述糖类选自由以下组成的组：淀粉或其衍生物、纤维素或其衍生物以及蔗糖。

5.如权利要求4所述的方法，其中至少一种酶选自由以下组成的组：α-葡聚糖磷酸化酶(αGP)、麦芽糖磷酸化酶、蔗糖磷酸化酶、纤维糊精磷酸化酶、纤维二糖磷酸化酶和纤维素磷酸化酶。

6.如权利要求4所述的方法，其中所述糖类是选自由以下组成的组的淀粉或其衍生物：直链淀粉、支链淀粉、可溶性淀粉、淀粉糊精、麦芽糖糊精、麦芽糖和葡萄糖。

7.如权利要求6所述的方法，其还包括将淀粉转化为淀粉衍生物的步骤，其中所述淀粉衍生物通过淀粉的酶水解或淀粉的酸水解来制备。

8.如权利要求6所述的方法，其中将4-葡聚糖转移酶(4GT)加入所述方法中。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述淀粉衍生物通过由异淀粉酶、支链淀粉酶、α-淀粉酶或其组合催化的淀粉的酶水解来制备。

10.如权利要求1所述的方法，其还包括：

将果糖转化为所述F6P的步骤，其中所述步骤由至少一种酶催化；并且任选地包括将蔗糖转化为所述果糖的步骤，其中所述步骤由至少一种酶催化。

11.如权利要求2所述的方法，其还包括：

将葡萄糖转化为所述G6P的步骤，其中所述步骤由至少一种酶催化，并且任选地包括将蔗糖转化为所述葡萄糖的步骤，其中所述步骤由至少一种酶催化。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述差向异构酶是阿洛酮糖6-磷酸3-差向异构酶。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述阿洛酮糖6-磷酸3-差向异构酶包含与SEQ IDNO:3或6具有45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％序列同一性的氨基酸序列，其中所述差向异构酶催化F6P转化为A6P。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述阿洛酮糖6-磷酸3-差向异构酶含有用于催化的(α/β)₈-桶结构域、在所述桶的第7个β-链的末端的Ser、在所述桶的第8个β-链的末端的Ser、在活性位点环中的Gly、在所述桶的第2和第3个β-链中的His、在所述桶的第2和第7个β-链中的Asp以及在所述桶的第2个β-链中的His-疏水残基-Asp标签。

15.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述磷酸酶是阿洛酮糖6-磷酸磷酸酶。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述阿洛酮糖6-磷酸磷酸酶包含与SEQ ID NO:9具有至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％序列同一性的氨基酸序列，其中所述磷酸盐催化A6P转化为阿洛酮糖。