[发明专利]对样品中干扰物的确定

说明书

本发明涉及一种确定个体的血液来源样品中非抗凝剂干扰物的方法，所述方法包括a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；和c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。另外，本发明涉及一种鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括根据前述方法确定非抗凝剂干扰物；并涉及与之相关的装置、试剂盒和用途。

本发明涉及确定个体的血液来源样品中非抗凝剂干扰物(interferent)的方法，所述方法包括a)确定所述样品中凝血时间相关参数的值；b)将a)确定的凝血时间相关参数的值与至少一个参考样品中确定的所述凝血时间相关参数的值比较；和c)基于步骤b)的比较结果，确定个体的血液来源样品中的所述非抗凝剂干扰物。另外，本发明涉及鉴定具有欠佳质量的血液来源样品的方法，所述方法包括根据前述方法确定非抗凝剂干扰物；并涉及与之相关的装置、试剂盒和用

临床化学中血液样品分析经常被样品中化合物的存在所混淆，所述化合物干扰所使用的测定。最突出的混杂因素是血红蛋白，主要通过样本中的溶血释放；胆红素，特别是在患有黄疸的患者样本中；和脂质浓度增加，特别是在来自脂血症患者的样本中；这也称为溶血、黄疸和脂血症(HIL)干扰。

检测和报告HIL干扰传统上由实验室人员通过视检各个标本进行；然而，这种过程是高度主观和可变的。最近，推出了对血清或血浆样品提供自动化检测HIL状态并且已经报告HIL浊度指数值的临床化学分析仪(例如参考Shin等人(2014),Ann Lab Med 34:307；Boyd等人(2015),Clin Chim Acta 450:3)。HIL指数(也称作阈值水平)是HIL干扰的半定量估计，使用分光光度测量和数学校正来确定干扰水平。在临床化学分析仪中，这些指数通常定义为干扰分析的HIL最低浓度，产生10％的偏差。

HIL指数可以在预分析性算法中用于若样品高于规定的报警指数，拒绝样品接受分析，其中所述报警指数由其相应的体外诊断试剂盒或分析仪生产商推荐。预定义的HIL指数是分析仪特定的，并且基本上基于几个选定波长的吸光度读数。由于胆红素、血红蛋白和脂血症的吸收光谱在一定程度上重叠，因此HIL指数的计算只能是半定量的。例如，血红蛋白的吸收光谱与胆红素的大部分光谱重叠，因此当使用光度法时，在溶血存在下估计黄疸程度或反之亦然是HIL测量的难题。

胆红素定量主要基于重氮偶联反应进行(US 6,326,208B1)。胆红素和对重氮苯磺酸产生有色产物(偶氮胆红素)，其在中性溶液中为红色并且在碱性溶液中为蓝色(van denBergh反应)。非结合胆红素(biliu)与偶氮染料反应缓慢，因为它在生理pH和温度不溶于水中。与葡糖醛酸(胆汁酸)结合的胆红素是水溶性的并且反应迅速。Biliu反应可以因所谓的加速物质例如甲醇或咖啡因加速(Walters和Gerarde(1970),Microchemical Journal 15:231；Valdes等人(1979),Annal.Clin.Lab.Science 9(3):251)。通常借助添加抗坏血酸终止该反应并且在分光光度计中在540nm读取染料的消光。一般，这些测定法需要使用危险化学化合物。例如通过使用来自日本鳗肌肉的胆红素诱导型荧光蛋白，作出尽力替换这类化合物的尝试(Iwatani等人(2016),Scientific Reports,doi 10.1038/srep28489)。还已知利用胆红素氧化酶的酶促方法。当胆红素氧化酶催化胆红素氧化成胆绿素时，它降低450nm处的吸光度。常规方法(重氮法、胆红素氧化酶法或分光光度测定法)的主要缺点是结果受血清样品中的浊度影响。例如，胆红素氧化酶法通过监测450nm处吸光度的变化，测量胆红素水平，这受到因血红蛋白或脂质乳液所致的浊度影响。

鉴于本领域已知方法的缺点，例如使用有毒化合物和由混浊样品引起的问题，需要改进的方法以确定血液样品中干扰性化合物，尤其是扰凝血和/或临床化学测定法的化合物的存在，避免现有技术的缺点。该问题通过本文公开的手段和方法解决。

因此，本发明涉及确定个体血液来源样品中非抗凝剂干扰物的方法，所述方法包括