[发明专利]抗凝血因子VIII抗体及其用途

说明书

本发明涉及特异性结合凝血因子VIII的抗体或其抗原结合片段，及其用途。更具体地，本发明涉及：特异性结合凝血因子VIII的抗体(其包括重链CDR和轻链CDR的特定序列)，或其抗原结合片段；一种柱子，其中该抗体或该其抗原结合片段(作为配体)与柱子固定相偶联用于分离或纯化重组凝血因子VIII；和使用该柱子纯化重组凝血因子VIII的方法。

技术领域

本发明涉及特异性结合凝血因子VIII的抗体或其抗原结合片段，且涉及其用途。更具体地，本发明涉及特异性结合凝血因子VIII的抗体或其抗原结合片段(该抗体或其抗原结合片段包括重链CDR和轻链CDR，每个CDR均具有特定序列)，一种用于纯化重组凝血因子VIII的柱子(该柱子偶联(coupled)有该抗体或其抗原结合片段)，和使用该柱子分离或纯化重组凝血因子VIII的方法。

技术背景

使用通过各种构成组分(例如凝血因子I(纤维蛋白原)以及凝血因子II、III、V、VII、VIII、IX、X、XI、XII和XIII(凝血因子的罗马数字并不指示顺序反应的顺序))的凝血级联形成稳定的(交联的)纤维蛋白的过程进行凝血(血液凝结)。当这些凝血因子中的即使一种缺乏时，由于不利的凝血，出血将会出现在人体内。由于此类血凝障碍，临床上可观察到的症状包括由于关节内溢血的关节畸形，由于肌肉内溢血的水肿，和颅内溢血。过量溢血(出血)可导致威胁生命的症状。

血友病(其是代表性血凝障碍)是遗传性X连锁隐性障碍且是由突变引起的罕见病。血友病分类为A型血友病(其是由凝血因子VIII(FVII)的缺乏引起的)和B型血友病(其是由凝血因子IX(FIX)的缺乏引起的)。此外，血友病可分类为轻度、中度和重度血友病，其取决于相关凝血因子的缺乏程度。据估计A型血友病在5,000个男性出生人口中出现约1个，且B型血友病在20,000个男性出生人口中出现约1个，且全世界有至少400,000名血友病患者。已经使用了用于外部施用用于血友病的按需和预防性治疗的缺乏的凝血因子的方法。缺乏的凝血因子的替代疗法可以延长血友病患者的预期寿命。

半个世纪以来，凝血因子VIII已从正常人的血浆中进行浓缩，分离和纯化，并已用于治疗A型血友病。然而，在20世纪80年代早期开始出现由施用血浆衍生的药物引起的出血性病毒(例如HIV和肝炎病毒(B和C型))感染的风险。出于此原因，自1988年以来，重组凝血因子VIII的使用(其消除出血性病毒感染的风险)已逐渐增加。

重组凝血因子VIII的分离和纯化通过一系列色谱分析步骤(如分离和纯化蛋白治疗剂的常规过程)进行。色谱分析法是使用两种互不相容的相分离靶物质的方法，例如，通过使其中该待分离的靶物质与各种物质一起溶解的流动相与另一相(即固定相)接触。在流动相流经填充有固定相的柱子时，样品混合物(其溶解在流动相)经受一系列与该固定相的相互作用。此类相互作用的行为取决于该样品混合物的成分(溶质)的物理或化学特性。每种组成成分的特性的差异引起与固定相相互作用强度的差异，并因此在流经填充有固定相的柱子的移动相的组合物的影响下导致每种溶质迁移速率的差异。取决于流动相的组成和流速进行分离的每种溶质以与固定相互相作用的强度相反的顺序洗脱。最微弱地保留在固定相的溶质首先从该柱子中洗脱，且最强力地保留在固定相的溶质最后洗脱。在洗脱样品组分期间，当由于一个组分(溶质)的洗脱时间与另一组分(溶质)的洗脱时间相似而分离组分是不利的时，可通过改变色谱分析条件(固定相和/或移动相)使得组分之间洗脱时间的差异足够长以便根据需要分离组分。因此，需要满足用于分离每种特定成分的最佳条件的固定相，且不断尽力设计它们。上述固定相通常由支撑物或基质(其与包含官能团(即连接基团)的配体附接)组成。色谱分析法可表征为各种类型的色谱分析法，每种色谱分析法基于所用的固定和流动相中样品组分的相互作用原理。此类色谱分析法的实例包括离子交换色谱分析法、亲水性相互作用色谱分析法和亲和色谱分析法。