[发明专利]用于确定抗体或配体结合和功能的测定法

权利要求书

1.用于确定特异性结合靶抗原的抗体或配体的结合的体外测定法，包括以下步骤：

i)提供细胞，所述细胞

a)在它们的表面表达靶抗原，和

b)用脂质样化合物标记，

ii)加入待测试的抗体或配体；和

iii)通过确定能量转移来测量与靶抗原的结合，其中所述脂质样化合物提供能量供体，并且能量接纳体与待测试的抗体或与结合该第一抗体的第二抗体共价或非共价缀合。

2.根据权利要求1所述的测定法，其中脂质样化合物是不天然存在于细胞的细胞膜中的合成化合物。

3.根据权利要求1或2所述的测定法，其中脂质样化合物能够自发地整合到细胞膜中。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的测定法，其中脂质样化合物包含能量供体。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的测定法，其中脂质样化合物与能量供体共价或非共价缀合。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的测定法，其中能量供体和接纳体是荧光共振能量转移(FRET)能量供体和接纳体，且在步骤iii)中测定的能量转移是荧光共振能量转移(FRET)。

7.根据权利要求6所述的测定法，其中FRET是时间分辨FRET。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的测定法，其中能量供体和接纳体是生物发光能量转移(BRET)能量供体和接纳体，且在步骤iii)中测定的能量转移是生物发光能量转移(BRET)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的测定法，其中脂质样化合物选自合成的功能-间隔物-脂质构建体(FSL)、合成的功能-间隔物-甾醇构建体(FSS)和两亲性分子，如荧光亲脂性阳离子羰花青染料。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的测定法，其中额外地在同一个小管中评估功能性，其中步骤i)中的细胞额外地包含c)在靶抗原的应答元件控制下的报道基因；且其中该测定法包括额外的步骤iv)通过将报道基因的表达水平与靶抗原活化或抑制的水平相关联来确定抗体或配体的功能性。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的测定法，其中报道基因选自编码荧光蛋白的基因或编码可检测其催化活性的酶的基因。

12.根据权利要求11所述的测定法，其中报道基因编码绿色荧光蛋白(GFP)或萤光素酶。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的测定法，其中靶抗原是细胞表面受体。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的测定法，其中测量与靶抗原的结合和确定靶抗原活化或抑制是顺次进行或同时进行的。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的测定法，其中靶抗原和反应元件是NF-κB途经的部分。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的测定法，其包括用含有靶抗原反应元件控制下的编码报道基因的DNA序列的表达载体转染细胞的预备步骤。

17.测定法，其基本如前文所述。