[发明专利]抑制畸胎瘤形成的多能干细胞衍生的神经前体细胞的制备方法在审
申请号: | 201780081462.2 | 申请日: | 2017-12-20 |
公开(公告)号: | CN110139928A | 公开(公告)日: | 2019-08-16 |
发明(设计)人: | 曺明洙;林美善;池素蓮 | 申请(专利权)人: | 第一药品株式会社 |
主分类号: | C12N5/0793 | 分类号: | C12N5/0793;C12N5/00 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 宋融冰 |
地址: | 韩国*** | 国省代码: | 韩国;KR |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 神经前体细胞 制备 畸胎瘤 多能干细胞 存活率 回收率 细胞 | ||
1.一种抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,包括:
步骤1),对神经前体细胞进行单细胞化;
步骤2),对在上述步骤1)的单细胞化的神经前体细胞进行再凝集;以及
步骤3),对在上述步骤2)的再凝集的神经前体细胞进行回收。
2.根据权利要求1所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法使用含有N-2添加剂、bFGF或其混合物的培养基作为细胞的培养用培养基。
3.根据权利要求2所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述N-2添加剂的添加量为0.5%(v/v)至2.0%(v/v)。
4.根据权利要求2所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述bFGF的添加量为0.0002%(w/v)至0.001%(w/v)。
5.根据权利要求1所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述步骤1)在涂敷有底物的培养皿中进行。
6.根据权利要求5所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述底物为选自由层粘连蛋白、L-鸟氨酸、基质胶及CeLLstart组成的组中的一种以上。
7.根据权利要求1所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,所述步骤2)在未涂敷有底物的培养皿中进行。
8.根据权利要求1所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法,其特征在于,上述步骤3)的再凝集的神经前体细胞的直径为10μm至80μm。
9.一种神经前体细胞,其特征在于,通过根据权利要求1所述的抑制畸胎瘤形成的神经前体细胞的制备方法制备而成。
10.一种神经细胞的分化方法,其特征在于,包括:
步骤1),对神经前体细胞进行单细胞化;
步骤2),对在上述步骤1)的单细胞化的神经前体细胞进行再凝集;
步骤3),对在上述步骤2)的再凝集的神经前体细胞进行回收;以及
步骤4),将在上述步骤3)的回收的神经前体细胞分化为神经细胞。
11.根据权利要求10所述的神经细胞的分化方法,其特征在于,上述分化在加入B27来代替bFGF的培养基中进行。
12.根据权利要求11所述的神经细胞的分化方法,其特征在于,上述B27的添加量为1%(v/v)至3%(v/v)。
13.根据权利要求10所述的神经细胞的分化方法,其特征在于,在上述神经前体细胞直径为500μm以上时进行传代。
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