[发明专利]T细胞治疗的病毒方法

权利要求书

1.一种产生遗传修饰细胞群体的方法，其包括：

提供来自人类受试者的细胞群体；

通过使用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统在细胞因子诱导型含SH2蛋白(CISH)基因中引入断裂来离体修饰所述细胞群体中的至少一个细胞；以及

将包含至少一种编码T细胞受体(TCR)的外源转基因的腺相关病毒(AAV)载体引入到所述细胞群体中的至少一个细胞中，以将所述外源转基因在所述断裂处整合到所述至少一个细胞的基因组中；

其中与使用微环载体在可比细胞中整合所述至少一种外源转基因相比，使用所述AAV载体整合所述至少一种外源转基因降低细胞毒性。

2.一种产生遗传修饰细胞群体的方法，其包括：

提供来自人类受试者的细胞群体；

通过使用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统在细胞因子诱导型含SH2蛋白(CISH)基因中引入断裂来离体修饰所述细胞群体中的至少一个细胞；以及

将包含至少一种编码T细胞受体(TCR)的外源转基因的腺相关病毒(AAV)载体引入到所述细胞群体中的至少一个细胞中，以将所述外源转基因在所述断裂处整合到所述至少一个细胞的基因组中；

其中在引入所述AAV载体后约4天，如通过荧光激活细胞分选(FACS)所测量的，所述细胞群体包含至少约90％的活细胞。

3.一种产生遗传修饰细胞群体的方法，其包括：

提供来自人类受试者的细胞群体；

向所述细胞群体引入包含指导多核酸的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统，其中所述指导多核酸与所述细胞群体内多个细胞中的细胞因子诱导型含SH2蛋白(CISH)基因特异性结合，并且所述CRISPR系统在所述CISH基因中引入断裂，从而抑制所述多个细胞中的CISH蛋白质功能；以及

向所述多个细胞中引入腺相关病毒(AAV)载体，其中所述AAV载体将至少一种编码T细胞受体(TCR)的外源转基因在所述断裂处整合到所述多个细胞的基因组中，从而产生遗传修饰细胞群体；

其中所述遗传修饰细胞群体中至少约10％的细胞表达所述至少一种外源转基因。

4.一种治疗人类受试者的癌症的方法，其包括：施用治疗有效量的离体遗传修饰细胞群体，其中至少一个所述离体遗传修饰细胞包含细胞因子诱导型含SH2蛋白(CISH)基因中的基因组改变，该基因组改变导致所述至少一个离体遗传修饰细胞中的CISH蛋白质功能的抑制，其中所述基因组改变是通过成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统引入的；并且其中所述至少一个离体遗传修饰细胞进一步包含编码T细胞受体(TCR)的外源转基因，其中所述外源转基因通过腺相关病毒(AAV)载体被引入到所述至少一个遗传修饰细胞的基因组的所述CISH基因中；并且其中所述施用在所述人类受试者中治疗癌症或改善癌症的至少一种症状。

5.一种治疗人类受试者的胃肠癌的方法，其包括：施用治疗有效量的离体遗传修饰细胞群体，其中至少一个所述离体遗传修饰细胞包含细胞因子诱导型含SH2蛋白(CISH)基因中的基因组改变，该基因组改变导致所述至少一个离体遗传修饰细胞中的CISH蛋白质功能的抑制，其中所述基因组改变是通过成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统引入的；并且其中所述至少一个离体遗传修饰细胞进一步包含编码T细胞受体(TCR)的外源转基因，其中所述外源转基因通过腺相关病毒(AAV)载体被引入到所述至少一个遗传修饰细胞的基因组的所述CISH基因中；并且其中所述施用在所述人类受试者中治疗癌症或改善癌症的至少一种症状。