[发明专利]用于从单T细胞克隆功能性T细胞受体的方法和材料在审
| 申请号： | 201780084892.X | 申请日： | 2017-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN110267981A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | M·沃伦;C·G·帕诺西斯;A·M·罗威;A·杜克提那维斯;E·舒特勒那维斯 | 申请（专利权）人： | 匹兹堡大学联邦系统高等教育 |
| 主分类号： | C07K14/725 | 分类号： | C07K14/725;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 钱文宇;陈扬扬 |
| 地址： | 美国宾夕*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸 核酸引物 集合 核酸载体 试剂盒 哺乳动物物种 编码序列 可变区 扩增 制备 成功 | ||
1.一种获得多个核酸载体的方法，所述核酸载体包含编码功能性T细胞受体的核酸，其中，所述方法包括：
(a)获得包含多个分开的位置的装置，其中各个所述分开的位置包含由获自单T细胞的RNA产生的cDNA，所述单T细胞经分选进入所述分开的位置，
(b)进行巢式扩增程序，采用各所述多个分开的位置的cDNA为模板，以获得各所述多个分开的位置的cDNA的第一扩增产物和第二扩增产物，其中，所述第一扩增产物包含编码Vα或Vγ区段的核酸，并且其中，所述第二扩增产物包含编码Vβ或Vδ区段的核酸，和
(c)将各所述多个分开的位置的cDNA的所述第一扩增产物和所述第二扩增产物组装进入核酸载体，以获得各所述多个分开的位置的cDNA的组装的核酸载体，其中，各所述多个分开的位置的cDNA的所述组装的核酸载体包含编码功能性T细胞受体的核酸。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述多个为大于50。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述多个为大于500。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述多个为大于5000。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述多个核酸载体是多个核酸表达载体。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述装置包含多孔板。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述多孔板是96孔板、384孔板或1536孔板。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，由获自单T细胞单一的RNA产生的所述cDNA包含由获自单一人T细胞的RNA产生的cDNA。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增产物包含编码Vα或Vγ区段的L序列的核酸。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增产物包含编码Jα或Jγ区段的核酸。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增产物包含编码Cα或Cγ区的5’部分的核酸。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增产物包含编码Vα或Vγ区段的L序列、Jα或Jγ区段和Cα或Cγ区的5’部分的核酸。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增产物包含编码Vβ或Vδ区段的L序列的核酸。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增产物包含编码Dβ或Dδ区段的核酸。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增产物包含编码Jβ或Jδ区段的核酸。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增产物包含编码Cβ或Cδ区的5’部分的核酸。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增产物包含编码Cβ或Cδ区的5’部分、Dβ或Dδ区段、Jβ或Jδ区段和Vβ或Vδ区段的L序列的核酸。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增产物包含衔接体序列，该衔接体序列通过所述巢式扩增程序的第二轮扩增添加至所述cDNA的扩增的模板序列。
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