[发明专利]增强功能性髓鞘产生的方法和组合物

权利要求书

1.一种生成增强功能性髓鞘产生的细胞的方法，所述方法包括对细胞进行以下基因修饰：

(i)修饰内源性PLP1基因以降低其抑制髓鞘产生的能力；

(ii)修饰内源性PLP1基因调控元件以降低其促进PLP1表达的能力；

(iii)修饰内源性PLP1基因调控元件以提高其抑制PLP1表达的能力，和/或

(iv)修饰内源性PLP1基因产物或促进PLP1表达的PLP1调控元件的基因产物以降低PLP1表达水平，

其中所述细胞产生功能性髓鞘，或者是产生或分化为产生功能性髓鞘的细胞的祖细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述修饰内源性PLP1基因包括引入减少内源性PLP1基因的表达或者导致PLP1转录物的无义介导衰变的突变。

3.如权利要求1所述的方法，其中内源性PLP1基因或内源性PLP1基因调控元件包括点突变，并且其中所述修饰内源性PLP1基因或内源性PLP1基因调控元件包括将点突变纠正为野生型序列。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中修饰内源性PLP1基因调控元件包括引入插入缺失以改变PLP1基因调控元件的活性。

5.如权利要求4所述的方法，其中内源性PLP1基因调控元件是PLP1增强子或启动子。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中修饰内源性PLP1基因或内源性PLP1基因调控元件包括在PLP1中引入包含核苷酸插入或缺失(插入缺失)的遗传修饰。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中修饰内源性PLP1基因包括引入包含PLP1的大量外显子缺失的遗传修饰。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中内源性PLP1基因是引发有害疾病的突变PLP1基因。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中使用核酸酶对细胞进行遗传修饰。

10.如权利要求9所述的方法，其中核酸酶包括锌指核酸酶(ZFN)、TALE-效应子(TALEN)、CRISPR/Cas系统或NgAgo系统。

11.如权利要求9所述的方法，其中用CRISPR/Cas系统核酸酶在外显子1或外显子3处修饰内源性PLP1基因。

12.如权利要求11所述的方法，其中用CRISPR/Cas系统核酸酶在外显子3的5'末端修饰内源性PLP1基因。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中修饰PLP1基因产物包括向细胞递送基因沉默剂。

14.如权利要求13所述的方法，其中基因沉默剂包括RNAi构建物(例如，siRNA、shRNA或miRNA)。

15.如权利要求13所述的方法，其中基因沉默剂包括反义寡核苷酸(ASO)。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中进行基因修饰的细胞显示增强的髓鞘产生(例如，由于细胞中与PLP1相关的毒性降低)。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中修饰内源性PLP1基因或PLP1基因调控元件减轻了细胞中与PLP1相关的细胞应激。

18.如权利要求9-15中任一项所述的方法，其中所述方法包括将细胞与包含核酸酶或基因沉默剂的递送载体相接触。