[发明专利]两部分式中介探针

权利要求书

1.用于检测至少一种靶分子的中介探针，其中，所述中介探针包括至少两个寡核苷酸，其特征在于

a)第一寡核苷酸包括探针区和中介体结合区，其中

i所述探针区对靶分子和/或模板分子具有亲和力，以及

ii所述中介体结合区对至少一种中介体具有亲和力，以及

b)至少一个另外的寡核苷酸是中介体，所述中介体

i经由所述中介体结合区与所述中介探针的所述第一寡核苷酸结合，以及

ii对至少一种检测分子具有亲和力，其中，所述中介体从所述中介探针的所述第一寡核苷酸释放后通过与所述检测分子相互作用触发可检测的信号。

2.根据权利要求1所述的中介探针，其特征在于，所述中介探针的所述第一寡核苷酸和/或中介体不包括用于产生信号的标记物。

3.根据权利要求1或2所述的中介探针，其特征在于，所述中介探针的第一寡核苷酸和/或所述中介体含有一种或多种用于产生信号的标记物，优选荧光分子、氧化还原分子、发光分子或其他产生信号的单元。

4.包括至少一种根据权利要求1至3之一所述的中介探针和至少一种检测分子的系统，其特征在于，所述至少一种检测分子包括一个或多个寡核苷酸并且包括与至少一种中介体相互作用的至少一个第一区域，以及

a)第二区域，包括荧光接受体或荧光供体和/或用于结合固相的化学基团和/或化学保护基团和/或氧化还原修饰和/或发光修饰，和/或

b)第三区域，包括荧光供体或荧光接受体和/或用于结合固相的化学基团和/或化学保护基团和/或氧化还原修饰和/或发光修饰，或者

c)至少一个第四区域，所述至少一个第四区域与具有荧光供体和/或荧光接受体的至少一种第一探针相互作用，和/或

d)至少一个第五区域，所述至少一个第五区域与包括荧光供体和/或荧光接受体至少一种第二探针相互作用。

5.根据前述权利要求所述的系统，其特征在于，所述检测分子具有发夹结构。

6.一种检测至少一种靶分子的方法，包括以下步骤：

a)提供至少一种根据权利要求1至3所述的中介探针和/或根据权利要求4或5所述的系统，

b)使所述至少一种中介探针的第一寡核苷酸的探针区与所述模板分子和/或靶分子的序列的结合，

c)扩增所述至少一种中介探针的第一寡核苷酸和/或模板分子和/或靶分子，

d)通过至少一种辅助分子释放所述至少一种中介体，

e)任选地使所述至少一种释放的中介体与所述至少一种检测分子的结合，以及

f)检测信号的变化。

7.根据前述权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一种中介体结合所述检测分子的第一区域并通过所述至少一种辅助分子来酶促延伸，所述辅助分子优选与结合中介体的3'末端结合，由此在所述检测分子中发生物理或化学可测量的变化。

8.根据权利要求6或7之一所述的方法，其特征在于，在所述中介探针的第一寡核苷酸的探针区与模板分子和/或靶分子的序列结合后，所述中介探针的第一寡核苷酸的3'末端通过辅助分子酶促延伸。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述中介探针的第一寡核苷酸和/或模板分子和/或靶分子的扩增是经由等温或非等温扩增方法进行的。

10.根据权利要求6至9之一所述的方法，其特征在于，所述检测分子具有至少一种荧光或发光修饰，并且在与所述至少一种中介体反应后，所述荧光或发光修饰可以借助于辅助分子从所述检测分子切掉，和/或除去所述检测分子的发夹结构的5'末端和/或展开所述发夹结构，并在所述检测分子上检测所述荧光信号或发光信号的变化。

11.根据权利要求6至10之一所述的方法，其特征在于，每种中介探针使用几种中介体和/或每种靶分子使用几种中介探针和/或几种检测分子。