[发明专利]甘油酯形式的n-3脂肪酸的酶促富集

权利要求书

1.一种用于富集作为甘油酯的n-3多不饱和脂肪酸n-3PUFA的酶促方法，所述方法包括：

(a)提供n-3PUFA结构部分的含量是5％至60％w/w的油，该n-3PUFA结构部分作为游离酸或所述油中所含的甘油酯和/或极性类脂的酰基而存在；

(b)以所述油的0.2-10％w/w的量向所述油中加入水或碱性缓冲水溶液，以得到pH为5至9的所述油和所述水或碱性缓冲水溶液的混合物；

(c)向步骤(b)中获得的混合物中加入脂肪酶制剂，其中脂肪酶固定在合适的聚合物载体上，其中所述脂肪酶表现出对饱和脂肪酸、单不饱和、双不饱和以及三不饱和脂肪酸或其脂肪酰基的高选择性，并且能够同时或连续地酯交换、水解和/或酯化所述油以得到所述油、所述水或碱性缓冲水溶液和所述脂肪酶制剂的混合物；

(d)提供烷基醇或烷基醇给体，和将所述烷基醇或烷基醇给体加入步骤(c)中获得的所述油、所述水或碱性缓冲水溶液和所述脂肪酶制剂的混合物中，以形成包含所述油、所述脂肪酶制剂、所述水或碱性缓冲水溶液和所述烷基醇或烷基醇给体的反应体系，其中所述油与所述烷基醇或烷基醇给体反应，并且使得所述反应达到至少40％的所述油到脂肪酸烷基酯FAEE的转化率，低于10％游离脂肪酸FFA和15％至60％甘油酯，基于反应体系中所用油的重量计；

(e)通过从所述反应体系中除去反应介质来停止反应，随后蒸发以除去多余的醇和水，以得到包含单甘油酯、双甘油酯和三甘油酯的甘油酯混合物和FAEE、FFA以及任选的极性类脂的产物；和

(f)通过从步骤(e)中获得的产物中蒸馏出脂肪酸烷基酯和游离脂肪酸来使所述甘油酯混合物与所述FAEE和FFA分离，以得到包含FAEE和FFA的馏出物和包含甘油酯混合物和任选的极性类脂的残留物，其中所述甘油酯混合物含有比所述油更高的ω-3脂肪酸含量，且回收率高于60％。

2.根据权利要求1的方法，其中(d)中的所述烷基醇或烷基醇给体是短链烷基醇或短链烷基醇给体，和/或(d)中的所述加入是逐步加入，和/或(e)中的所述蒸发是闪蒸。

3.根据权利要求1的方法，其中从反应产物蒸馏出的所述脂肪酸烷基酯和游离脂肪酸的混合物包含低于所述油中存在的总n-3多不饱和脂肪酸的40％的n-3多不饱和脂肪酸结构部分。

4.根据权利要求1的方法，其中所述烷基醇是乙醇或甲醇中的任何之一。

5.根据权利要求2的方法，其中所述短链烷基醇给体是碳酸二甲酯或碳酸二乙酯中的任何之一的醇给体。

6.根据权利要求1的方法，其中所述蒸馏是分子蒸馏、短程蒸馏或薄膜蒸馏中的任何之一。

7.根据权利要求1的方法，其中n-3多不饱和脂肪酸结构部分是DHA、DPA和EPA结构部分中的任何之一及其至少两种的任何混合物。

8.根据权利要求1的方法，其中所述脂肪酶衍生自以下中的任何之一：南极假丝酵母A(Candida antarctica A)即CALA、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、雪白根霉(Rhizopus niveus)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、南极假丝酵母B(Candida antarctica B)即CALB、黑曲霉(Aspergillus niger)、卡门柏青霉(Penicillium camembertii)、产碱杆菌属(Alcaligenes sp.)、伯克霍尔德菌属(Burkholderia sp.)、绵毛嗜热丝胞菌(Thermomyceslanuginose)或粘质色杆菌(Chromobacterium viscosum)。

9.根据权利要求1的方法，其中所述脂肪酶固定在疏水性多孔聚合物树脂载体上。

10.根据权利要求9的方法，其中所述疏水性多孔聚合物树脂载体是疏水性多孔脂族或芳族树脂载体。