[发明专利]蛋白酶变体及其用途

说明书

本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体、编码其的核酸以及与其生产和使用有关的组合物和方法，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体包括与一种或多种参比枯草杆菌蛋白酶相比具有改善的稳定性和/或污垢去除性的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。

本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体、编码其的核酸以及与其生产和使用有关的组合物和方法，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体包括与一种或多种参比枯草杆菌蛋白酶相比具有改善的稳定性和/或污垢去除性的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。

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蛋白酶(也称为朊酶)是指具有分解其他蛋白质的能力的酶蛋白质。蛋白酶具有通过在形成蛋白质的肽或多肽链中将氨基酸连接在一起的肽键的水解来开始蛋白质分解代谢以进行蛋白水解的能力。蛋白酶作为蛋白质消化酶的这种活性被称为蛋白水解活性。存在用于测量蛋白水解活性的许多众所周知的方法(Kalisz,Microbial Proteinases[微生物朊酶],在Fiechter(编辑)，Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology[生化工程/生物技术进展],(1988)中)。例如，蛋白水解活性可以通过分析各个蛋白酶水解商业底物的能力的比较测定来确定。可用于分析蛋白酶或蛋白水解活性的示例性底物包括但不限于二甲基酪蛋白(西格玛公司(Sigma)C-9801)、牛胶原(西格玛公司(Sigma)C-9879)、牛弹性蛋白(西格玛公司(Sigma)E-1625)和牛角蛋白(ICN生物医学公司(ICNBiomedical)902111)。使用这些底物的比色测定是本领域熟知的(参见例如WO 99/34011和美国专利号6,376,450，这两者都通过援引并入本文)。

丝氨酸蛋白酶是具有启动蛋白质肽键水解的活性位点丝氨酸的酶(EC编号3.4.21)。丝氨酸蛋白酶包含种类繁多的具有广泛特异性和生物学功能的酶，基于这些酶的结构，这些酶被进一步划分为胰凝乳蛋白酶样(胰蛋白酶样)和枯草杆菌蛋白酶样。原型枯草杆菌蛋白酶(EC编号3.4.21.62)最初从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)获得。枯草杆菌蛋白酶及其同源物是MEROPS分类方案的S8肽酶家族的成员(Rawlings,N.D等人(2016)Twenty years of the MEROPS database of proteolytic enzymes,their substratesand inhibitors[蛋白质水解酶及其底物和抑制剂的二十年MEROPS数据库]Nucleic AcidsRes[核酸研究]44,D343-D350)。S8家族的成员在其氨基酸序列中具有顺序为Asp、His和Ser的催化三联体。尽管已经开发了许多可用于清洁应用的变体蛋白酶，但是仍然需要改善的蛋白酶变体。