[发明专利]生物物质固定化方法及其利用

说明书

本发明的一方式中提供固定能优异的新型生物物质固定化方法及其利用，该生物物质固定化方法的特征在于，使用为了将由生物物质形成的被固定化物质进行固定化而具有对应于生物物质的表面修饰的固定化载体，预先在所述固定化载体表面将所述被固定化物质进行固定，并设置用于将所述固定化载体保持于生物物质固定化用基体的层，在该层上将所述固定化载体以点状进行印戳。

技术领域

本发明涉及将蛋白质、肽或核酸等生物物质在基体上稳定地进行固定的生物物质固定化方法。本发明特别适合用于在将生物物质固定后，表达抗原抗体反应，从而检测分析该抗原抗体反应的方法。特别适合在过敏检测和肿瘤标志物检测等中使用的利用抗原抗体反应的检查诊断用生物芯片。

背景技术

在将DNA或蛋白质等多种生物物质作为被固定化物质以小点状配置在基体表面上的微阵列型检测方法中，有将被固定化物质点样于基体上并进行固定，或者在基体上合成所期望的生物物质的方法。

用于进行微阵列型检测的免疫测定的蛋白质芯片中，需要以某种形式将抗体或抗原固定化于基体上。相对于以合成法成为主流的DNA芯片，蛋白质芯片和肽芯片中难以适用合成法。即，目前，DNA芯片中，广泛采用在基体上合成期望的序列的核苷酸的方法。但是，以现状，在基体上无法合成蛋白质。对于肽，虽然可以在基体上合成，但仅通过合成无法得到足够的纯度。因此，在蛋白质芯片和肽芯片中，将纯化蛋白质或纯化肽直接印戳(スタンプ)在基体表面上的方法属于主流。

因此，市售有在玻璃或塑料表面导入了用于使固定化变容易的羧基(-COOH)或氨基(-NH₂)等官能团的基体。此外，将光官能团进行配置而能够固定任何有机物的光固定法也已投入实际使用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2005/111618号

专利文献2：日本公开专利公报“特开2010-101661号公报”

专利文献3：国际公开第2014/007034号

非专利文献

非专利文献1：Victor ET Mancilla and Rudolf Volkmer“Peptide arrays onplanar supports”,Methods in Molecular Biology,1352,3-17(2015)

非专利文献2：Tinashe B Ruwona,Ryan Mcbride,Rebecca Chappel,Steven RHead,Phillip Ordoukhanian,Dennis R.Burton,and Mansun Law“Optimization ofpeptide arrays for studying antibodies to hepatitis C virus continuousepitopes”J Immunol Methods.15,35-42(2014)

发明内容

发明要解决的课题

如上所述，已经开发了在基体上将各种应进行固定化的生物物质通过共价键进行固定化的方法。此外，虽然还有防止非特异性吸附效果优异的生物物质固定化剂以及使用其的生物物质固定化方法和生物物质固定化基体等的发明，但关于蛋白质芯片或肽芯片尚未确立作为诊断芯片的可靠性。其最大原因是难以在保持蛋白质的三维结构或基于此的生理功能的状态下再现性良好地进行固定。加之，对于比蛋白质小很多的分子的肽，不仅需要确保固定量，还需要对齐分子的取向以保持其功能恒定，即需要在肽的N末端或C末端进行固定。此外，在平面基体上的反应体系中，如抗原抗体反应那样，最终利用与蛋白质的相互作用而进行检测时，尽可能避免属于反应配偶体的蛋白质彼此相互碰撞而阻碍反应的所谓的空间阻位，也是重要的原因。