[发明专利]莱鲍迪苷E生物合成产生甜菊醇糖苷莱鲍迪苷D4

权利要求书

1.一种突变体CP1酶，该突变体CP1酶由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。

2.一种核酸，该核酸由SEQ ID NO:8的核苷酸序列组成。

3.一种突变体CP1酶，该突变体CP1酶由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成。

4.一种核酸，该核酸由SEQ ID NO:10的核苷酸序列组成。

5.一种宿主细胞，该宿主细胞包含能够产生C1m2酶的载体，该C1m2酶由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其中该宿主细胞选自下组，该组由以下组成：细菌、酵母、丝状真菌、蓝细菌藻类和植物细胞。

7.如权利要求5所述的宿主细胞，其中该宿主细胞选自下组，该组由以下组成：埃希氏杆菌属；沙门氏菌属；芽孢杆菌属；不动杆菌属；链霉菌属；棒状杆菌属；甲基弯曲菌；甲基单胞菌；红球菌属；假单胞菌属；红杆菌属；集胞藻属；酵母属；接合酵母属；克鲁维酵母菌属；假丝酵母属；汉逊酵母属；德巴利氏酵母属；毛霉菌属；毕赤酵母属；球拟酵母属；曲霉属；节丛孢属；短杆菌属；微杆菌属；节细菌属；柠檬酸杆菌属；克雷白氏杆菌属；泛菌属；和梭菌属。

8.如权利要求5所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是从选自下组的植物分离的细胞，该组由以下组成：大麦；草籽作物；豆类；阔叶树；针叶树；和芸苔属物种。

9.如权利要求5所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是从短柄草属物种分离的细胞。

10.如权利要求5所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是从选自下组的植物分离的细胞，该组由以下组成：大豆；油菜籽；向日葵；棉花；玉米；烟草；苜蓿；小麦；燕麦；高粱；稻；西兰花；花椰菜；卷心菜；欧洲防风草；甜瓜；胡萝卜；芹菜；香芹菜；番茄；马铃薯；草莓；花生；葡萄；甜菜；甘蔗；豌豆；黑麦；亚麻；饲草；拟南芥；水稻；野大麦；柳枝稷；和海甘蓝。

11.一种产生甜菊醇糖苷组合物的方法，该方法包括将底物与重组多肽一起孵育，该重组多肽由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成，其中该底物是莱鲍迪苷E，其中通过该方法产生的甜菊醇糖苷化合物是莱鲍迪苷D4，使得该甜菊醇糖苷组合物包含莱鲍迪苷D4，其中所述莱鲍迪苷D4具有以下结构：

12.一种产生莱鲍迪苷D4的方法，该方法包括将底物与重组多肽一起孵育，该重组多肽由SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成，其中该底物是莱鲍迪苷E，其中所述莱鲍迪苷D4具有以下结构：

13.如权利要求12所述的方法，该方法进一步包括：将重组蔗糖合酶与底物和重组多肽一起孵育。

14.一种用于从莱鲍迪苷E合成莱鲍迪苷D4的方法，该方法包括：

制备包含莱鲍迪苷E、选自下组的底物、和由SEQ ID NO 7的氨基酸序列组成的C1m2酶的反应混合物，该组由以下组成：蔗糖、尿苷二磷酸(UDP)和尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)；以及

将该反应混合物孵育足够的时间以产生莱鲍迪苷D4，

其中将葡萄糖与莱鲍迪苷E共价偶联以产生莱鲍迪苷D4，

其中所述莱鲍迪苷D4具有以下结构：

15.如权利要求14所述的方法，该方法进一步包括将蔗糖合酶添加至该反应混合物中。

16.如权利要求15所述的方法，其中该蔗糖合酶选自下组，该组由以下组成：拟南芥蔗糖合酶1、拟南芥蔗糖合酶3和绿豆蔗糖合酶。