[发明专利]核酸扩增方法和核酸分析用装置

说明书

提供一种用于在基板上规则地配置、无扩增偏倚地形成扩增核酸片段簇的方法和装置。本发明涉及的方法中，在具有具备亲水性的多个第一表面、和围绕各个前述多个第一表面且亲水性比前述第一表面低的第二表面的基板上，形成封入有作为模板的核酸的液滴，在基板上的液滴内进行核酸扩增反应后，将液滴除去，进一步在基板上进行核酸扩增反应。

技术领域

本发明涉及基板上的核酸扩增方法和核酸分析用装置。

背景技术

专利文献1中，作为基板上的核酸扩增方法，记载了可以包括下述步骤的制作生物分子的图形化表面的方法：(a)准备试剂的步骤，该试剂包括(i)在表面不连续、具有被表面的间隔区域分隔的特定点的阵列、以及(ii)含有多种不同的目标生物分子的溶液；以及(b)使试剂反应，将生物分子输送至特定点，使各个生物分子分别附着于各个特定点的步骤，该步骤中对间隔区域施加电场，从间隔区域获取生物分子。

专利文献2中记载了作为将核酸等物质封入于基板上的方法而使用容纳部13的底面为亲水性且侧壁12的上表面为疏水性的阵列。因此，在珠子导入工序中使用亲水性的第一溶剂20的情况下，能够更有效地将含有珠子21、21’的第一溶剂20导入容纳部13中，进一步，能够防止珠子容纳工序中使用的疏水性的第二溶剂30进入容纳部13，因而能够使容纳部13内的亲水性的第一溶剂20被疏水性的第二溶剂30被覆而密闭，形成液滴(Droplet)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO2013/188582号

专利文献2：国际公开WO2016/006208号

发明内容

发明所要解决的课题

并列型测序仪中，为了提高分析的容易性，需要形成在基板上规则地配置、单一分子来源的扩增核酸片段簇的技术。

专利文献1中，记载了形成在基板上规则地配置、单一分子来源的扩增核酸片段簇的技术。可是，多个模板的扩增反应是在没有隔离的溶液内进行的，因此存在下述问题：由于模板DNA在基板上附着的速度的差异，先前有助于形成簇的DNA分子在周边基板上成为进一步形成簇的模板，产生扩增偏倚。因此，需要在基板上使各模板在隔离的液体中扩增的技术。

另一方面，专利文献2中记载了在基板上规则地配置、将核酸等物质按照液滴进行隔离的技术。可是，没有实现基板上的扩增核酸片段簇的形成，因此必须用另外的装置将形成的扩增核酸片段簇配置在基板上。

本发明的目的在于，提供在基板上规则地配置、无扩增偏倚地形成扩增核酸片段簇的技术。

用于解决课题的方法

为了解决上述课题，本发明提供一种核酸扩增方法，其特征在于，包括：

准备基板的工序，前述基板具有以任意的规则性配置的有亲水性的多个第一表面、和围绕各个前述多个第一表面且亲水性比前述第一表面低的第二表面，在前述第一表面固定或配置有与作为模板的核酸特异性结合的分子，

在前述基板上供应含有前述作为模板的核酸的试样溶液与含有核酸扩增底物和核酸合成酶的反应溶液的混合溶液，在前述第一表面上配置前述混合溶液，前述作为模板的核酸结合在与前述作为模板的核酸特异性结合的分子上的工序，

在前述基板上供应疏水性溶剂，形成封入有配置在前述第一表面上的前述混合溶液的液滴的工序，

在前述液滴内进行前述核酸的扩增反应的工序，

从前述基板上将前述疏水性溶剂除去的工序，

在前述基板上供应含有核酸扩增底物和核酸合成酶的反应溶液的工序，以及

进行前述核酸的扩增反应的工序。