[发明专利]用于ALS的突变型FUS模型

权利要求书

1.一种构建ALS模型的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将供体DNA、特异性靶位点导向RNA(gRNA)和Cas9 mRNA共同注入到小鼠胚胎中，将野生型对应体中的FUS基因突变成ALS患者的突变型FUS基因获得KI突变型小鼠；

(2)野生型小鼠繁殖KI突变型创建者，确认正确的基因组插入和种系传递；和

(3)将KI突变型小鼠回交至C57BL/6J至少5代，

其中所述gRNA的核苷酸序列为gcgagcacagacaggatcgcAGG，

其中所述供体DNA片段包含FUS基因突变以及分别在其两侧的包含PSTⅠ切割位点的左右同源臂，所述供体DNA片段长度为1kb，并且

其中所述FUS基因突变是FUS-R521C。

2.根据权利要求1的所述方法，其中FUS-R521C通过定向突变的方式获得。

3.根据权利要求1所述的方法，其中通过以下技术中的至少一种来实现所述定向突变：

CRISPR-CAs9和小鼠受精卵或胚胎干细胞的同源重组。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述供体DNA包含一个用于基因分型的PSTⅠ切割位点。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述gRNA核苷酸序列gcgagcacagacaggatcgcAGG中3'端的AGG为PAM位点。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述野生型小鼠为C57BL/6J野生型小鼠。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述ALS模型为KI突变型小鼠和/或分离自所述小鼠的组织或细胞。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法获得的ALS模型或其后代在用于筛选ALS相关疾病的药物中的应用。