[发明专利]一种检测草贝母和轮叶贝母成分的方法

权利要求书

1.一种检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征为，实时荧光PCR检测草贝母和轮叶贝母成分的引物探针，分别为：

实时荧光PCR检测草贝母源性成分的引物探针，分别为：上游引物P1：CCAGTCTTGATCGTTACAAAGG，下游引物P2：GAACCTTCTTCAAAAAGGTCTAAAGG，带有荧光染料的探针序列为：AGCATCGAGAAAGTTATTGGGGAAGAAAATCA

实时荧光PCR检测轮叶贝母成分的引物探针，分别为：上游引物P1：CTACTCGGGACCTCGCAAT，下游引物P2：CACCGCAGAGGCATCGAC，带有荧光染料的探针序列为：TCCTCGGACACTATTT。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征在于：检测草贝母成分探针的荧光染料为：5‘端为FAM标记，3’端为TAMRA标记；检测轮叶贝母成分探针的荧光染料为：5‘端为VIC标记，3’端为MGB标记。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征在于如下步骤：

1)提取待检样品基因组DNA；

2)以所提取的DNA作为模板，加入权利要求1所述的引物对和荧光染料标记的探针以及酶反应液进行实时荧光PCR反应，记录样品反应的Ct值。

4.根据权利要求3所述的一种快速检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征在于：将检测草贝母和轮叶贝母的上游引物、下游引物和探针稀释至10μmol/L，然后等体积合并为混合引物(探针)，所述的实时荧光PCR反应体系为：

5.根据权利要求4所述的一种快速检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR反应条件为95℃ 10min，1个循环95℃ 15s，58℃ 30s，40个循环。

6.根据权利要求3、4和5所述的一种快速检测草贝母和轮叶贝母成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR方法还设有空白对照、阴性对照、阳性对照，判定标准为：

空白对照：以ddH₂O为模板，按照2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40；

阴性对照：以非草贝母和轮叶贝母基因组DNA为模板，按照2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40；

阳性对照：以含有草贝母和轮叶贝母基因组DNA为模板，按照2和3所述条件，进行实时荧光PCR反应，FAM和VIC通道检测Ct值大于或等于40检测Ct值小于或等于36；

待测样品FAM和(或)VIC通道检测Ct值大于或等于40，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者，判定该样品未检出草贝母和(或)轮叶贝母成分；

待测样品FAM和(或)VIC通道检测Ct值小于或等于36，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者，判定该样品检出草贝母和(或)轮叶贝母成分；

待测样品FAM和(或)VIC通道检测Ct值在36-40之间，重做实时荧光PCR扩增，再次扩增后结果Ct值大于40且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，判定该样品未检出草贝母和(或)轮叶贝母成分；再次扩增后结果Ct值仍小于40且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，判定该样品检出草贝母和(或)轮叶贝母成分。