[发明专利]用于通过核酸聚合酶对衬底多核苷酸进行大小受控的同聚物加尾的方法和组合物

权利要求书

1.一种试剂盒，其包含：

模板非依赖性核酸聚合酶；

衰减子多核苷酸，其包含衰减子序列和定位在所述衰减子序列附近的序列W，其中所述衰减子序列的长度为10至100个核苷酸，其中所述衰减子多核苷酸包含选自至少一个核糖核苷酸、至少一个脱氧核苷酸、C3间隔区、磷酸、双脱氧核苷酸、氨基以及反向脱氧胸苷的3'封闭基团；

衔接子多核苷酸，其中所述衔接子多核苷酸包含与所述衰减子多核苷酸的序列W互补的序列X；

与衰减子序列互补的核苷酸；以及

连接酶，

其中所述衰减子多核苷酸控制通过模板非依赖性核酸聚合酶添加至衬底多核苷酸的核苷酸尾部，以及其中所述衔接子多核苷酸与序列W杂交并被连接至衬底多核苷酸的所述核苷酸尾部，并且

所述衰减子多核苷酸和所述衔接子多核苷酸被退火到一起。

2.一种试剂盒，其包含：

模板非依赖性核酸聚合酶；

衰减子多核苷酸，其包含衰减子序列和定位在所述衰减子序列附近的序列W，其中所述衰减子序列的长度为10至100个核苷酸，其中所述衰减子多核苷酸包含选自至少一个核糖核苷酸、至少一个脱氧核苷酸、C3间隔区、磷酸、双脱氧核苷酸、氨基以及反向脱氧胸苷的3'封闭基团；

衔接子多核苷酸，其中所述衔接子多核苷酸包含与所述衰减子多核苷酸的序列W互补的序列X；

与衰减子序列互补的核苷酸；以及

连接酶，

其中所述衰减子多核苷酸控制通过模板非依赖性核酸聚合酶添加至衬底多核苷酸的核苷酸尾部，以及其中所述衔接子多核苷酸与序列W杂交并被连接至衬底多核苷酸的所述核苷酸尾部，并且

其中所述衰减子多核苷酸和所述衔接子多核苷酸是同一多核苷酸的部分。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其中所述衰减子多核苷酸和所述衔接子多核苷酸形成发夹结构。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其中序列W被定位成与所述衰减子序列5'相邻。

5.如权利要求2所述的试剂盒，其中序列W被定位成与所述衰减子序列5'相邻。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其中序列W被定位成与所述衰减子序列5'相邻。

7.一种试剂盒，其包含：

模板非依赖性核酸聚合酶；

衰减子多核苷酸，其包含衰减子序列和定位在所述衰减子序列附近的序列W，其中所述衰减子序列的长度为10至100个核苷酸，其中所述衰减子多核苷酸包含选自至少一个核糖核苷酸、至少一个脱氧核苷酸、C3间隔区、磷酸、双脱氧核苷酸、氨基以及反向脱氧胸苷的3'封闭基团；

衔接子多核苷酸，其中所述衔接子多核苷酸包含与所述衰减子多核苷酸的序列W互补的序列X；

与衰减子序列互补的核苷酸；以及

连接酶，

其中所述衰减子多核苷酸和所述衔接子多核苷酸被退火到一起或者是同一多核苷酸的部分，

其中所述衰减子多核苷酸控制通过模板非依赖性核酸聚合酶添加至衬底多核苷酸的核苷酸尾部，以及其中所述衔接子多核苷酸与序列W杂交并被连接至衬底多核苷酸的所述核苷酸尾部，

其中序列W被定位成与所述衰减子序列5'相邻。

8.如权利要求1-7中任一项所述的试剂盒，其中所述衰减子序列包含选自以下的核苷酸：2'-脱氧胸苷5'-一磷酸(dTMP)、2'-脱氧鸟苷5'-一磷酸(dGMP)、2'-脱氧腺苷5'-一磷酸(dAMP)、2'-脱氧胞苷5'-一磷酸(dCMP)、2'-脱氧尿苷5’-一磷酸(dUMP)、胸苷一磷酸(TMP)、鸟苷一磷酸(GMP)、腺苷一磷酸(AMP)、胞苷一磷酸(CMP)、尿苷一磷酸(UMP)、碱基类似物以及其组合。