[发明专利]RhuA突变体及其在制备二维复合材料中的应用

权利要求书

1.一种RhuA突变体，其特征在于：它由序列如SEQ ID No.1所示的天然RhuA单体氨基酸序列的第98位的天冬氨酸、第264位的甘氨酸突变为半胱氨酸而形成。

2.根据权利要求1所述的RhuA突变体，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.用于编码权利要求1-2中任一项所述RhuA突变体的基因。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：它的序列如SEQ ID No.3所示。

5.携带有权利要求3或4所述基因的重组表达载体。

6.转化/转染有权利要求5所述重组表达载体的宿主菌。

7.根据权利要求6所述的宿主菌，其特征在于：所述宿主菌包括大肠杆菌。

8.构建权利要求1-2中任一项所述的RhuA突变体的方法，其特征在于包括：

提供定点突变试剂；

以天然RhuA的DNA为模板，与所述定点突变试剂混合均匀，进行定向诱变，使天然RhuA单体氨基酸序列的第98位的天冬氨酸、第264位的甘氨酸突变为半胱氨酸，之后进行T4酶连，获得携带有权利要求3或4所述基因的重组表达载体；

以及，将所述重组表达载体转入宿主细胞进行表达，获得所述RhuA突变体。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于包括：

以CaCl₂法将所述重组表达载体转入宿主细胞，挑取单克隆菌接种于培养基中，加入氨苄青霉素，于35~37℃培养12~16h后，加入抗生素，于35~37℃培养2~3h，加入异丙基硫代半乳糖苷，在35~37℃继续诱导培养12~14h，获得所述RhuA突变体。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于还包括：将表达结束后获得的RhuA突变体用裂解缓冲液重悬，并置于冰上进行超声破碎，离心取上清液，之后进行过滤除杂、纯化处理。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述纯化处理包括超强阴离子层析柱纯化和/或硫酸铵纯化。

12.权利要求1-2中任一项所述的RhuA突变体在制备金属纳米二维复合材料中的应用。

13.一种二维复合材料的制备方法，其特征在于包括：

提供权利要求1-2中任一项所述的RhuA突变体或按照权利要求8-11中任一项所述的方法构建RhuA突变体；

以所述RhuA突变体作为基元构筑高度有序、具有高反应位点的RhuA二维晶体模板，所述RhuA二维晶体模板的表面具有暴露的巯基；

将所述RhuA二维晶体模板与金属纳米粒子均匀混合，通过巯基与金属纳米粒子相互作用，形成高度有序且均一的二维纳米结构，获得二维复合材料。

14.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于具体包括：

将所述RhuA突变体置于包含三（羟甲基）氨基甲烷缓冲液、β-巯基乙醇和氯化锌缓冲液的混合溶液中进行透析除盐，之后浓缩，获得RhuA二维晶体模板。

15.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于具体包括：

将所述RhuA二维晶体模板与金属纳米粒子按体积比1：100~1：300均匀混合形成混合反应体系，并于16~27℃反应4~18h，形成所述的二维复合材料。

16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于：所述混合反应体系的pH值为6.8~7.5。