[发明专利]一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用

说明书

本发明“一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用”涉及小反刍兽疫病毒多肽合成物领域。所述小反刍Nigeria 75/1疫苗株合成肽，其包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的肽段I。所述小反刍野毒株合成肽，其包括氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的肽段III。本发明提供了两种敏感、特异性好的小反刍H多肽，此多肽可用于鉴别小反刍病毒自然感染动物和疫苗免疫动物血清。本发明多肽主要用于制作鉴别诊断试纸条包被抗原，减少了使用全病毒的危害性，避免病毒扩散。合成肽纯度高，可用于制备特异、敏感、安全、可靠的小反刍兽疫野毒株和疫苗株病毒血清抗体检测试纸条。本发明多肽抗原的优点：分子量小、活性高、抗原稳定，特异性好，制备过程简便、安全可控等优点。

技术领域

本发明涉及小反刍兽疫病毒多肽合成物，具体地，涉及一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株 差异性合成肽及其应用。

背景技术

小反刍兽疫(peste des petits ruminants，PPR)，又名小反刍兽伪牛瘟、小反刍兽瘟疫，山 羊瘟疫、传染性脓疱状胃炎、胃肠炎-肺炎综合症等，是由副黏病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫 病毒(peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一种急性接触性传染病。主要感染小反 刍动物(以山羊和绵羊为主)，以突然发热、眼口鼻排分泌物、口炎、腹泻、肺炎和死亡为特 征。OIE将其列为A类疫病。我国规定为一类动物疫病。PPR自1942年首次在西非象牙海 岸的科特迪瓦发现后，一直呈蔓延趋势，目前已经扩展到亚非地区的40多个国家，对全球养 样羊业造成巨大威胁，引起巨大的经济损失和政治影响，因此小反刍兽疫的防控工作受到世 界各国政府的高度重视。

自从2007年我国西藏阿里地区发生小反刍兽疫疫情以来，已经遍布全国29省市，对我国 卫生安全构成了严重威胁。据不完全统计，2007-2014年全球大约有70多个国家向OIE报告 发生PPR疫情或怀疑存在PPRV感染。PPR的存在不但影响经济，还对国际贸易产生不可估 量的损失。为了与世界接轨，并有效保障养羊业稳定健康发展，2015年底，我国农业部制定 了《全国小反刍兽疫消灭计划(2016-2020年)》。

PPRV主要编码6种结构蛋白(核蛋白(N)、磷蛋白(P)、多聚酶大蛋白(L)、基质蛋 白(M)、融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H))和2种非结构蛋白(C和V)。根据N和F基 因的遗传特性，PPRV可分为4个基因系：Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系和Ⅳ系。目前我国流行的PPRV 属于Ⅳ系，而疫苗毒株Nigeria75/1属于基因Ⅱ系。有研究表明，H基因在这4个基因谱系 中表现出高度相似的进化关系，故可以用其分析不同毒株的进化关系。如能找到一种能区分 野毒株和疫苗株的抗原或者单抗，就能解决鉴别诊断问题。基于以上原因，我们对基因Ⅳ系 野毒株和疫苗毒株Nigeria75/1的6种主要结构蛋白做了分析，发现不同毒株之间，H(血凝 素蛋白)和F(融合蛋白)蛋白差异最大。其中野毒株和疫苗株H蛋白氨基酸序列差异最大， 两者之间存在抗原差异区。

研究发现，F蛋白具有协助病毒穿过细胞膜将基因组导入宿主靶细胞中的作用，H蛋白则 辅助F蛋白发挥作用，这两种蛋白不仅是小反刍兽疫病毒的主要毒力蛋白，同时也是主要的 保护性抗原。H(Hemagglutinin)也称为附加蛋白(attachment protein)，是PPRV上的一 种糖蛋白，构成病毒粒子表面的一种纤突。H含有609个氨基酸，是6个结构蛋白中最易变 异的蛋白。H蛋白作为病毒和宿主细胞膜结合过程中的受体，具有调节病毒吸附并渗入宿主 细胞的作用，刺激机体产生中和抗体，参与体液保护性免疫，是机体主要的保护性抗原，也 是引起宿主细胞发生病变的主要决定因素。