[发明专利]用于定量检测卵巢癌外泌体抗原的试剂盒及其配制方法

说明书

本发明涉及ELISA检测试剂盒技术领域，具体地说是一种高容量沥青/环氧树脂基改性硬炭负极材料及其制备方法，包括试剂盒体，其特征在于，所述的试剂盒体内放置有2块抗CD63的克隆抗体包被的酶标板、1块抗CA125的克隆抗体包被的酶标板、10ml的HPR标记的CA125抗体、10ml的HPR标记的CD63抗体、作为显色剂A液的20ml的H₂O₂、作为显色剂B液的20ml的TMB，2瓶5ml的终止液。本发明同现有技术相比，该试剂盒利用外泌体的酶联免疫吸附方法来快速检测卵巢癌抗原，对卵巢癌能进行早期诊断；检测的准确度高、特异性强，检测样品范围广泛，包括血清、腹水、血浆、组织液等，反应周期短，效果好。

技术领域

本发明涉及ELISA检测试剂盒技术领域，具体地说是一种高容量沥青/环氧树脂基改性硬炭负极材料及其制备方法。

背景技术

卵巢癌是继子宫内膜癌及宫颈癌发生率居第三的妇科恶性肿瘤，其死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢癌发病隐匿，缺乏早期的典型症状和成熟的早期诊断方法，当出现临床症状引起患者重视就诊时，往往已属晚期，当出现广泛的腹腔转移，根治性手术已难以实施。

外泌体存在于各种体液中，可以作为细胞间信息传递的载体，在细胞交流中发挥着重要作用，特别是在疾病标志物筛查领域具有重要作用。外泌体(exosome)是大小为50到150nm直径的分泌膜封闭囊泡(细胞外囊泡或者EV)，囊泡中包裹着核酸和蛋白质。各种细胞都能分泌外泌体，外泌体分泌后被释放到细胞外空间并进入循环。各种细胞类型，如免疫细胞，血小板或内皮细胞将外泌体释放到血液中。上皮肿瘤细胞分泌携带上皮细胞粘附分子(EpCAM)的外泌体；黑素瘤衍生的外泌体含有肿瘤相关抗原Mart-1和酪氨酸酶相关蛋白-2(TYRP2)；来自胃癌，乳腺癌和胰腺癌的外泌体携带人表皮生长因子受体(HER)家族的成员。然而，这些标志物对于癌症外泌体来说都不是特异性的，识别和分离体液中的癌症特异性外泌体将有助于癌症的检测和监测，并能够特异性鉴定癌症外泌体中DNA，RNA和蛋白质含量，而不会污染非癌症外泌体。这使癌症和辅助治疗的早期监测成为可能。

外泌体检测的方法主要有纳米粒子追踪分析技术、流式细胞仪技术、动态光散射技术等：

纳米粒子追踪分析是一种能够对表征纳米颗粒分布的光散射技术，对于液体中悬浮的纳米颗粒，其布朗运动与大小有直接相关关系，根据这个原理，能够实时追踪每个颗粒的布朗运动并给出颗粒大小和个数信息，由于外泌体的生物样本中颗粒都是分散的，因此用纳米粒子追踪分析不能区分外泌体的亚型；

流式细胞术是一种采用激光束激发单行流动的细胞，对它的散射光和携带的荧光进行探测，从而完成细胞分析和分选的技术，但是由于外泌体微泡的体积较少，常规的流式方法不好检测；

动态光散射是通过研究散射光在某一固定空间位置上散射光强随时间的涨落现象来获取混杂在其中的待测颗粒粒径的有效技术，但是对于外泌体样本复杂，因此不适合对大小不一的外泌体进行测量。在外泌体分离和检测技术过程中消耗的试剂过多，且外泌体损失较大，时间较长。

因此，发展一种经济的、快速检测外泌体尤其是卵巢癌患者的外泌体是非常必要的，而且对于死亡率极高的卵巢癌迫切需要提高早期诊断方法。

酶联免疫吸附法ELISA：免疫诊断中的一项新技术，由于酶的高效催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎的抗原或抗体在数分钟后可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种利用外泌体的酶联免疫吸附方法来快速检测卵巢癌抗原的试剂盒，以及早的、简便的用于早期卵巢癌的检测。