[发明专利]一种以ROBO1为靶点的双特异性抗体及其制备和应用

权利要求书

1.双特异性抗体，其特征在于，其包含特异性结合肿瘤细胞表面抗原分子的抗原结合结构域R和特异性结合免疫细胞的抗原结合结构域I，所述结构域I与结构域R直接连接或通过连接肽连接；所述结构域R是Slit2D2蛋白；所述结构域I由Anti CD3 VH结构域和AntiCD3 VL结构域组成；

所述双特异性抗体还包括FC端；所述FC端为FCknob片段和FChole片段，所述FCknob片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的序列；和FChole片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的序列；

所述双特异性抗体还包括Anti CD3 CH结构域和Anti CD3 CL结构域；

所述AntiCD3 CH结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的序列；所述Anti CD3CL的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的序列；

所述双特异性抗体由重链A、重链B和一条轻链组成，其中重链A的结构为：

Slit2D2–Anti CD3 V H-Anti CD3 CH–FC；重链B的结构为：Slit2D2–FC；所述轻链结构为Anti CD3 VL-Anti CD3 CL；

所述重链A的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的序列；所述重链B的氨基酸序列如SEQID NO：10所示的序列；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的序列。

2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述免疫细胞是T细胞。

3.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述Slit2D2的氨基酸序列如SEQID NO：1所示的序列；所述Anti CD3 VH的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列；所述AntiCD3VL的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的序列。

4.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，编码所述重链A的核苷酸序列如SEQID NO：11所示的序列；编码所述重链B的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示的序列；编码所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示的序列。

5.权利要求1-4中任一项所述双特异性抗体的制备方法，其包括：将双特异性抗体的基因克隆到表达载体上；以及任选地，将表达载体转入宿主细胞中表达。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体选自质粒。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体选自细菌载体或病毒载体中的一种或两种。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pCDNA3.4载体。

9.一种药物组合物，其特征在于，其包含选自：权利要求1-4中任一项所述的双特异性抗体，或权利要求5-8所制备的双特异性抗体中的一种或多种。

10.如权利要求9所述的药物组合物，其还包括药学上可接受的辅料。

11.权利要求1-4任一项所述的双特异性抗体、权利要求5-7所制备的双特异性抗体中的一种或多种在制备治疗癌症的药物中的应用，所述的癌症为高表达Robo1的肿瘤。