[发明专利]一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法

权利要求书

1.一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：实验鼠的准备

将实验动物饲养在普通级动物房中饲养，保持室内温度为20-25 ℃，相对湿度40 -70%，动物自由取食，自由饮水，饮用水均为经净水器净化后的自来水，符合WHO饮用水规范；

S2：麻醉

将实验鼠分成两组，一组为手术处理组，一组为对照组；首先肌肉注射0.05 mg/kg阿托品，5 min后，肌肉注射4 mg/kg氯胺酮，进行麻醉，此后使用含1.0 % 异氟烷的0.8-1.5 L/min氧气做维持麻醉；

S3：手术过程

动物接受手术的当天，将手术部的毛发剃除，并使用碘伏及乙醇清洁消毒围手术区域，随后实验鼠被放在手术台上，四肢固定，将手术部四周悬浮固定，使用碘伏360度消毒备皮，在手术部位上，于肋骨末端用手术刀做一个小型刺切口，对照组实验鼠仅进行此步操作，无后续操作；用一根1.2 mm直径，5 cm长的克氏针从肋骨末端插入，在确保克氏针固定后，将其插入肋骨骨髓腔0.5 cm，随后在肋骨上做一个 1-2 cm长的正面切口，钝性分离其上的肌肉，使肋骨暴露，使用手持牵开器将肋骨周围软组织牵开，形成约1cm宽的开口；使用无菌笔在肋骨上标记出需要行截骨术的部位，用牙科钻的震荡锯头在实验鼠肋骨上切除1 cm长的部分，截骨术完成后，检查骨断端，确保没有残余骨膜覆盖在骨截面处；将此前置于肋骨末端的克氏针继续插入，横跨截断处，插入对侧断端1 cm深，切断远端肋骨外露的克氏针，将切断后的断端使用冲头和骨科锤钉入肋骨内；在肋骨截骨部位的软组织处使用可吸收线做连续缝合，但并不拉紧，使其部位形成一个口袋，使得合适的针头可以插入其中并到达克氏针周围区域以方便给药；

S4：术后护理

术后3天，实验鼠将持续接受丁丙诺啡至少0.02 mg/kg肌肉注射，每天两次，间隔约8小时；手术结束时及术后3天，注射防感染药物；术后3天，每天至少2次监测动物的疼痛，不舒适和其它生命体征；

S5：体重检测

每三天测量一次动物体重并进行记录，手术处理组和对照组对比分析，并对术后实验鼠进行活动能力评分；

S6：取材分析

手术60天后，将动物安乐死并取出截骨术后修复的骨段，该骨段暴露后，使用振动锯从克氏针上方处将肋骨截断，用经无菌生理盐水浸泡过的纱布海绵将该骨段包裹，放置于5mL离心管中，保存于-20 ℃，在进行骨生物力学检测前，使用微型CT生成骨片段的三维成像及体积骨矿密度。

2.根据权利要求1所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，所述步骤S2，需要保证所有手术过程均在麻醉和严格的无菌条件下进行，动物接受手术的当天，将手术肢端的毛发剃除，并使用碘伏及70%乙醇清洁消毒周围手术区域。

3.根据权利要求1所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，所述步骤S3，在切除过程中，使用带针无菌注射器向肋骨及其周边喷撒无菌盐水降温，以防切割处温度过高引起断端的热损伤。

4.根据权利要求1所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，所述步骤S4，待动物从麻醉中恢复后，允许实验鼠正常活动，食物和水将被置于笼底，以保证动物可以容易获取，在食物中额外添加诱食剂帮助实验鼠更多进食。

5.根据权利要求1所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，所述步骤S4，使用头孢曲松钠50 mg/kg肌注，以防止感染。

6.根据权利要求1-5中任一所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于，所选择的手术实验对象为8周的雄性大白鼠。

7.根据权利要求 1中所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于：所述造模完成后，选用微型CT扫描，触诊，生物力学测试及病理切片指标等对模型进行评价，均证明造模成功，与临床一致性很高。

8.根据权利要求 1中所述的一种大白鼠肋骨缺损模型的构建方法，其特征在于：所述骨缺损模型在用于研究过程中，在给药后将肋骨截骨部位的软组织肌层缝线拉紧，皮肤层也用可吸收线做皮下连续缝合，肋骨远端的克氏针入口也用可吸收线做非连续缝合。