[发明专利]一种聚合利用四个水稻纹枯病抗性基因的方法

说明书

本发明公开了一种聚合利用四个水稻纹枯病抗性基因的方法。该方法是利用D130B、D223、D535、D1042四个标记分别PCR扩增Lemont和扬稻4号组配的重组自交系分离群体内的不同株系，将D130B标记扩增扬稻4号的带型命名为A、扩增Lemont的带型命名为E，将D223标记扩增扬稻4号的带型命名为B、扩增Lemont的带型命名为F，将D535标记扩增Lemont的带型命名为C、扩增扬稻4号的带型命名为G，将D1042标记扩增Lemont的带型命名为D、扩增扬稻4号的带型命名为H。选择携带A、B、C、D四种带型数目越多的株系即是纹枯病抗性越强的株系，选择携带E、F、G、H四种带型数目越多的株系即是纹枯病抗性越差的株系。该方法可同时聚合4个水稻纹枯病抗性基因以选育抗纹枯病的水稻材料，可大大提高育种效率。

技术领域

本发明涉及一种聚合利用四个水稻纹枯病抗性基因的方法，该方法可利用4个分子标记同时聚合4个纹枯病抗性基因以选育抗纹枯病的水稻材料。

背景技术

水稻是关乎我国粮食安全的重要粮食作物。我国水稻育种界选育纹枯病抗病水稻的传统方法都是通过表型选择进行的，即用纹枯病致病菌在不同的水稻发育时期对水稻单株进行接种鉴定。由于传统的接种鉴定大部分是在田间种植条件下进行的，接种鉴定的结果误差大，准确性差，而且不同年份的接种结果存在差异，导致接种鉴定结果的准确率低。通过分子标记对水稻纹枯病抗性相关基因进行选择可以在水稻苗期即对纹枯病抗性进行选择，选择的准确率高，可以大大提高育种效率。水稻的纹枯病抗性是一个数量性状，受多个数量性状基因座位(QTL)控制。水稻科研界目前已经定位出许多与水稻纹枯病抗性相关的QTL，但是哪些QTL是共同调控水稻纹枯病抗性的？哪些QTL可以同时应用在一个育种过程中？我们对这些问题的了解并不多。根据目前已经报道的与水稻纹枯病抗性基因连锁的分子标记随意将不同的几个抗性基因聚合在一起，希望获得抗性加强的水稻材料这样一个美好的想法在实际操作过程中往往不可行，因为随意选出的几个抗性基因很有可能存在基因之间的上位性互作效应，导致聚合了多个抗性基因的材料的纹枯病抗性反而降低了。为了有效的提高育种效率，加快育种进程，本发明提出一种聚合利用四个水稻纹枯病抗性基因的方法，该方法利用4个分子标记同时聚合了4个水稻纹枯病抗性基因，以培育抗纹枯病的水稻新株系，该方法可大大提高育种效率。

发明内容

本发明包括以下步骤：

(1)将水稻品种Lemont作为母本与水稻品种扬稻4号作为父本进行杂交，并构建重组自交系分离群体Fn，所述Fn中的n≥5；

(2)用分子标记D130B、D223、D535、D1042分别PCR扩增步骤(1)获得的重组自交系分离群体内的不同株系的叶片DNA，根据D130B标记与水稻第1染色体上的纹枯病抗性基因qSBRLEYD1A连锁的特点，根据D223标记与水稻第2染色体上的纹枯病抗性基因qSBRLEYD2A连锁的特点，根据D535标记与水稻第5染色体上的纹枯病抗性基因qSBRLEYD5A连锁的特点，根据D1042标记与水稻第10染色体上的纹枯病抗性基因qSBRLEYD10A连锁的特点，将D130B、D223、D535、D1042标记的PCR扩增产物分别进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，将D130B标记扩增扬稻4号的带型命名为A，将D223标记扩增扬稻4号的带型命名为B，将D535标记扩增Lemont的带型命名为C，将D1042标记扩增Lemont的带型命名为D，将D130B标记扩增Lemont的带型命名为E，将D223标记扩增Lemont的带型命名为F，将D535标记扩增扬稻4号的带型命名为G，将D1042标记扩增扬稻4号的带型命名为H；选择携带A、B、C、D带型数目越多的株系即是纹枯病抗性越强的水稻株系，选择携带E、F、G、H带型数目越多的株系即是纹枯病抗性越差的水稻株系。