[发明专利]一种利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法

权利要求书

1.一种利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)选取蓝色犁头霉菌，菌种活化后，制成种子液转接到液体马铃薯培养基中扩大培养；培养期间，于发酵液中加入山奈酚；所述蓝色犁头霉菌的拉丁名称为：Absidiacoerulea，于中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏，菌株保藏编号为：CICC 40302；

(2)加入山奈酚后的第2-4天向发酵液中添加8-12％葡萄糖或13-17％蔗糖作为转化促进剂以转化发酵液，再继续震荡培养；

(3)加入山奈酚后的第5-8天，取出发酵液并提取分离紫云英苷，得转化总提物；

(4)将上述步骤获得的转化总提物通过硅胶柱层析分离、葡聚糖凝胶纯化，最终获得目标产物-紫云英苷。

2.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)中菌种的活化方法为：将蓝色犁头霉菌菌株接种于固体马铃薯培养基平板上，置于恒温箱中，23-26℃培养1-2d，得活化的蓝色犁头霉菌菌株。

3.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)中蓝色犁头霉菌种子液的制备方法为：将活化后的蓝色犁头霉菌菌株在无菌条件下以接种环挑取菌丝接种于液体马铃薯培养基中培养，计数，以浓度为(2-4)×10⁸CFU/mL的菌液作为种子液。

4.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(1)中种子液转接到液体马铃薯培养基中扩大培养的具体方法为：取种子液接种至30-60倍体积的液体马铃薯培养基中，24-26℃恒温震荡培养22-26h，再将山奈酚溶于丙酮成饱和溶液，按丙酮含量3-5％加入发酵液。

5.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(3)中发酵液中紫云英苷的具体提取分离方法为：加入山奈酚后的第5-8天，取出发酵液，18-22kHz超声处理8-12min后，以等体积乙酸乙酯萃取2-4次，合并萃取液，于48-52℃减压浓缩，获得转化总提物。

6.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(4)中硅胶柱层析分离的具体方法为：

a.15-30倍转化总提物质量的柱层层析硅胶作为分离硅胶，干法装柱；

b.将转化总提物溶于甲醇，加入1-3倍总提物质量的柱层层析硅胶作为拌样硅胶，搅拌均匀后挥干溶剂，干法上样；

c.乙酸乙酯-甲醇系统梯度洗脱，收集10:1洗脱部位。

7.根据权利要求6所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述柱层层析硅胶为200-300目硅胶，在使用前先于100-110℃烘箱中活化1-3h。

8.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法，其特征在于，所述步骤(4)中葡聚糖凝胶纯化的具体方法为：所获样品溶于甲醇，葡聚糖凝胶柱氯仿-甲醇＝1:1为洗脱剂纯化。