[发明专利]利用嗜热丝状真菌发酵一步法制备带侧链木寡糖的方法

权利要求书

1.一种利用嗜热丝状真菌发酵一步法制备带侧链木寡糖的方法，其特征在于：是利用疏棉状嗜热丝孢菌以固体发酵或液体发酵的方法制备带侧链木寡糖。

2.根据权利要求1所述利用嗜热丝状真菌发酵一步法制备带侧链木寡糖的方法，所述利用疏棉状嗜热丝孢菌以固体发酵方法制备带侧链木寡糖的步骤是：

(1)取浓度为1×107-8个/mL的疏棉状嗜热丝孢菌孢子悬液1-2ml加入100-200mL无菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中以活化孢子，50-55℃，150-250转/分钟摇床培养3-5天，制得种子液；

(2)按碳源250-300g/L，氮源50-100g/L，水600-700mL/L的配方配制固体发酵培养基，混匀备用；其中，所述碳源是玉米芯、小麦麸皮或玉米秸秆，或其以任意比例混合物；所述氮源是黄豆渣或豌豆渣，或其以任意比例混合物；

(3)将步骤(1)制得的种子液按体积比1:100-500接入10-50L固体发酵培养基中，以1-5L/min的速率通气，同时以1-2转/小时的速率搅拌，连续好氧发酵5-8天；

(4)发酵期间每隔1-2天取样40-50g，加入80-100mL H2O，用DNS法和荧光辅助糖电泳(FACE)检测培养基中的还原糖含量，当检测到培养基中的还原糖含量达到最高且FACE糖谱显示木三糖以下的还原糖条带基本消失，剩余的寡糖条带保持稳定时，停止发酵；收集培养基，加入其2-3倍重量的水，于4-10℃浸泡10-12h，用8-10层纱布过滤，滤液即为含带侧链木寡糖的发酵液；滤渣可以作为菌种再利用。

3.根据权利要求2所述利用嗜热丝状真菌发酵一步法制备带侧链木寡糖的方法，所述利用疏棉状嗜热丝孢菌以固体发酵方法制备带侧链木寡糖的步骤是：

(1)取浓度为1×108个/mL的疏棉状嗜热丝孢菌孢子悬液2ml加入150mL无菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中以活化孢子，55℃，200转/分钟摇床培养3天，制得种子液；

(2)按碳源300g/L，氮源50g/L，水650mL/L的配方配制固体发酵培养基，混匀备用；其中，所述碳源是玉米芯或小麦麸皮或玉米秸秆；所述氮源是黄豆渣或豌豆渣；

(3)将步骤(1)制得的种子液按体积比1:100接入10L固体发酵培养基中，以5L/min的速率通气，同时以2转/小时的速率搅拌，连续好氧发酵8天；

(4)发酵期间每隔1天取样50g，加入100mL H2O，用DNS法和荧光辅助糖电泳(FACE)检测培养基中的还原糖含量，当检测到培养基中的还原糖含量达到最高且FACE糖谱显示木三糖以下的还原糖条带基本消失，剩余的寡糖条带保持稳定时，停止发酵；收集培养基，加入其2倍重量的水，于4℃浸泡12h，用10层纱布过滤，滤液即为含带侧链木寡糖的发酵液；滤渣可以作为菌种再利用。