[发明专利]MALDI-TOFMS即用型质控活菌标准品在审
| 申请号： | 201810018888.X | 申请日： | 2018-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN108102966A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 崔生辉;刘娜 | 申请（专利权）人： | 中国食品药品检定研究院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/04;C12Q1/14;C12R1/445 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 于鹏 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 标准品 活菌 菌株 母液 质控 存活率 冻干 稀释 制备 冻干保护剂 微生物检验 阳性对照菌 单菌落 高通量 目标菌 菌球 质谱 成活 悬浮 保存 新鲜 检验 | ||
1.MALDI-TOF MS即用型质控活菌标准品，其特征在于，通过以下步骤制备得到：
(1)培养目的获得单菌落来源的二代菌株，经过生化鉴定，确认种属正确；
(2)收集新鲜二代菌株，悬浮于冻干保护剂中，涡旋使二代菌株分散成单个菌落，且经5μm滤膜进行过滤，除去未能分散成单个菌落细胞团，制成活菌标准品母液；
(3)稀释活菌标准品母液，接种于平板培养基中，经培养对菌落进行计数，结合稀释倍数计算活菌标准品母液中菌株浓度；同时，将稀释后的活菌标准品母液制成菌球，并将菌球接种于平板培养基中，经培养对菌落进行计数，再与冻干前浓度进行比较，计算获得冻干存活率；
(4)依据冻干存活率，制备含有目标菌数的质控活菌标准品，保存于-20℃，即为MALDI-TOF MS即用型质控活菌标准品。
2.根据权利要求1所述的MALDI-TOF MS即用型质控活菌标准品，其特征在于，步骤(2)所述冻干保护剂的组分包括蔗糖、葡糖糖和牛血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述的MALDI-TOF MS即用型质控活菌标准品，其特征在于，步骤(3)所述菌球的制备方法为：取稀释后的活菌标准品母液以20μL/球的量滴入含有液氮的烧杯中进行速冻，然后置于冷冻干燥机中进行冻干14～18小时，再放入2mL的西林瓶中，将胶塞虚掩的盖在西林瓶上，然后用冷冻干燥机进行真空轧盖。
4.根据权利要求1所述的MALDI-TOF MS即用型质控活菌标准品，其特征在于，步骤(3)所述菌球的制备方法为：取稀释后的活菌标准品母液以20μL/球的量滴入含有液氮的烧杯中进行速冻，然后置于冷冻干燥机中进行冻干16小时，再放入2mL的西林瓶中，将胶塞虚掩的盖在西林瓶上，然后用冷冻干燥机进行真空轧盖。
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