[发明专利]一种产可水解制备高聚合度ＸＯＳ木聚糖酶的菌株及应用

权利要求书

1.一种产高分子量木聚糖酶的细菌菌株，是通过透明圈法从土壤中筛选得到，将其命为类芽孢杆菌（Paenibacillus sp.）B1709，保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC NO.14870，保藏日期：2017年11月7日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.如权利要求1所述的一种产可水解制备高聚合度低聚木糖木聚糖酶的菌株及其应用。

3.权利要求1所述的菌株能够有效应用于细菌产木聚糖酶的研究，不仅可以丰富产木聚糖酶微生物资源，并通过进一步了解细菌木聚糖酶理化特性，为潜在的后续应用提供了研究依据，实验证实该菌株产的木聚糖酶能水解制备高聚合度低聚木糖（木三糖和木四糖），本发明为生产木三糖和木四糖带来巨大的实际应用价值（提升目标产品纯度，减少分离纯化成本）。

4.权利要求3所述的方案有以下步骤：

（1）、制备发酵液：按质量为2%的接种量将产木聚糖酶的Paenibacillus sp. B1709接种到发酵培养基中，30℃、160 r/min摇瓶振荡培养72h得木聚糖酶发酵液；将制得的酶发酵液10000r/min、4℃下离心5min，取上清液，

（2）、菌株 B1709产特种木聚糖酶XynA的纯化：将粗酶液（即发酵预处理液）经过聚合物PEG4000、18%的硫酸铵等双水相萃取粗提纯，先以醋酸缓冲溶液为平衡液的Sephacryl S-200凝胶过滤层析，再以柠檬酸缓冲溶液为平衡液的离子交换层析进一步纯化，

（3）、特种木聚糖酶酶学及水解性质研究：菌株Paenibacillus sp. B1709产特种木聚糖酶最适pH值及温度分别为5.5和60℃，在 pH5.0~6.0和40℃~50℃范围内酶活稳定性较好，以榉木木聚糖为底物测定木聚糖酶的酶促动力学参数Km为20.41（mg/mL），Vmax为80（units/min），经过纯化的酶液加入醋酸-醋酸钠缓冲溶解，以榉木木聚糖为底物，在55℃水浴摇床中反应，水解产物经过离心后加入阴阳离子树脂，过夜处理后采用薄层层析法（TLC）进行定性分析。

5.权利要求4所述的当以榉木木聚糖为底物时，所酶解产物只有木三糖和木四糖，不产生木糖及木二糖，可用于高聚合度低聚木糖（DP值3-4）的靶向性高效制备。