[发明专利]用于快速繁殖过表达bFGF的C17.2神经干细胞的组合物

说明书

本发明属于细胞培养领域，更具体涉及一种快速繁殖过表达bFGF的C17.2神经干细胞的组合物。本发明提供了一种快速繁殖过表达bFGF的C17.2神经干细胞的组合物，该组合物包括肉苁蓉苷和蛇床子素。在一些优选实施例中，所述组合物由DMEM培养基或DMEM/F12培养基、B27、谷氨酰胺、肉苁蓉苷和蛇床子素组成。本发明提供的用于体外培养过表达bFGF的C17.2神经干细胞的组合物，体外培养时可有效扩增过表达bFGF的C17.2神经干细胞，神经干细胞增殖能力强，且不易自分化，具有重要的临床价值。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，更具体涉及一种快速繁殖过表达bFGF的C17.2 神经干细胞的组合物。

背景技术

缺血性脑卒中是因脑血栓形成或脑栓塞所致脑供血障碍而引起的局部脑组织缺血、缺氧，进而引起脑组织软化、死亡。缺血性脑卒中不仅具有发病率和死亡率高的特点，还具有高致残率及高复发率的特点，给家庭和社会带来了沉重的经济负担和社会问题，是当今迫切需要解决的医学难题。目前缺血性脑卒中的根本和最有效治疗措施是超早期溶栓治疗。超早期溶栓治疗可以使闭塞血管再通恢复血液供应。但由于溶栓治疗时间窗短暂(发病后3小时内)，并具有严格的适应症和禁忌症，在美国仅有3％～5％的急性缺血性脑卒中患者从中受益。抗凝、抗血小板等药物治疗和支架置入等介入治疗手段虽有一定效果，但治疗结果并不令人满意。近年来，人们越来越关注采用干细胞移植的方式来治疗缺血性脑卒中。干细胞移植能够改善缺血性脑卒中造成的神经功能缺陷。

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是由155个氨基酸组成的18kD多肽，主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、胎盘等组织，可促进来源于中胚层和神经外胚层的多种类型细胞增殖、分化，具有广泛的生物学效应。bFGF 在成年哺乳动物脑组织中呈低水平表达，主要由星形胶质细胞产生，但在脑组织损伤后bFGF表达显著上调。bFGF促进血管生成、轴突再生、神经保护、组织修复、动员内源性神经干细胞，在中枢神经系统发育与损伤修复中具有重要作用。在局灶性脑缺血损伤大鼠模型中，bFGF抑制神经细胞凋亡，增加脑缺血区血液供应，显著缩小脑梗塞面积，改善神经功能障碍。

尽管动物实验结果令人振奋，但bFGF治疗缺血性脑卒中的II/III期临床试验结果并不理想，因出现低血压、白细胞升高等全身性不良反应而被中止试验。临床试验结果不佳的主要原因为：bFGF体内半衰期短，静脉给药后迅速降解，难以保持其生物活性；bFGF是生物大分子，难以透过血脑屏障；FGF受体体内分布广泛，存在于全身许多组织器官，经静脉全身给药副作用大。

所以将干细胞移植和bFGF两者联合起来，将bFGF基因序列利用基因转染技术插入到干细胞中，使得干细胞能够高表达bFGF蛋白，对于治疗缺血性脑卒中是一个新的思路。C17.2神经干细胞系是经过v-myc基因改造后得到的永生化的细胞，最早是从新生小鼠的小脑中分离的到的。C17.2神经干细胞系是一种很好的治疗缺血性脑卒中的细胞来源。因此，本申请发明人构建了过表达bFGF蛋白的C17.2神经干细胞用于治疗缺血性脑卒中。干细胞表达的bFGF蛋白一方面可以提高移植的干细胞在缺血性微环境下的生存能力，又可以作为蛋白治疗药物去改善神经功能。而干细胞一方面作为表达bFGF蛋白的载体，避免了bFGF蛋白作为蛋白药物半衰期段、难以透过血脑屏障、全身反应等缺陷，另一方面也使得移植干细胞本身的存活率升高，同时bFGF蛋白的促分化的功能可以促进干细胞的分化，能够更好的改善缺血性脑卒中后的神经功能缺陷。

然而，由于神经干细胞需要在体外进行扩大培养，而神经干细胞体外增殖能力弱，机制不明，给临床应用带来了很大困难。我们构建的过表达bFGF的C17.2 神经干细胞同样面临这些问题，常用的添加bFGF，表皮生长因子(EGF)，抗生素，N2/B27，谷氨酰胺等添加剂成分的无血清培养基，培养过表达bFGF的C17.2 神经干细胞，体外增殖差，且易自发分化，失去干细胞的特性和功能。

发明内容