[发明专利]一种虫草素转化为3’-脱氧肌苷的生物转化方法

说明书

本发明涉及活性物质的生物转化，具体为一种虫草素转化为3’‑脱氧肌苷的生物转化方法。将虫草素溶解于水得终浓度为0.25‑1.0mg/mL的虫草素溶液，而后加入1‑5g L.casei菌体混匀，置于28‑37℃条件下厌氧培养12‑72h，即得使虫草素转化为3’‑脱氧肌苷。本发明利用L.casei能够将虫草素进行生物转化，进而生成新的化学成分3’‑脱氧肌苷，经高效液相色谱(HPLC)、液质联谱(LC/MS)和核磁共振波谱(NMR)检测后证明虫草素被生物转化后生成了3’‑脱氧肌苷(3’‑Deoxyinosine)，其转化率达98.3％。

技术领域

本发明涉及活性物质的生物转化，具体为一种虫草素转化为3’-脱氧肌苷的生物转化方法。

背景技术

虫草素(Cordycepin)又名3’-脱氧腺苷(3’-Deoxyadenosine)，是蛹虫草中的主要活性成分，也是第一个从真菌中提取分离出的一种核苷类抗菌素，分子式为C₁₀H₁₃N₅O₃。虫草素具有抗菌、抗病毒、干扰人体RNA及DNA合成和显著抑制多种肿瘤细胞生长的作用。此外，虫草素还有免疫调节、抗炎、抗衰老、扩张支气管等药理作用。

人们通常通过食用冬虫夏草(或蛹虫草)来达到保健及治疗的目的，而作为虫草核心功能成分的虫草素在人体肠道中的代谢尚不清楚。大量研究表明，中药中的某些化学成分可由肠道菌群对其化学成分进行代谢，从而形成新的活性成分并被人体吸收。杨秀伟等发现，罗汉果皂苷Ⅲ经人肠内细菌转化后生成罗汉果皂苷Ⅱ_A1和罗汉果醇，进而在体内体现出生物学活性。刘铁汉等发现淫羊藿苷易被肠道内菌丛所代谢。因此，可以推测虫草素极有可能被肠道菌群代谢，从而产生新的化学成分进入人体发挥作用。

干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，L.casei)属于乳杆菌属(Lactobacillus)，是一种重要的肠道益生菌。L.casei广泛存在于食物与肠道中，因其能够耐受有机体的防御机制，其中包括口腔中的酶、胃液中低pH值和小肠的胆汁酸等，所以L.casei进入人体后可以在肠道内大量定植。近年来对乳杆菌的研究发现，乳杆菌能够调节机体胃肠道的正常菌群，保持肠道微生态平衡，提高食物消化率和生物效价，并能够抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生。以L.casei为主要成分制成的系列产品(如食品、饮料、保健品等)深受广大消费者青睐，市场需求量巨大。近年来，虫草与L.casei复合发酵形成的新的食品与保健品相继出现，开辟了虫草功能食品的新领域。然而L.casei发酵过程对虫草素是否有代谢，代谢后的产物对人体健康是否有影响，这是目前虫草新产品开发过程中亟待解决的关键问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种虫草素转化为3’-脱氧肌苷的生物转化方法

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种虫草素转化为3’-脱氧肌苷的生物转化方法，将虫草素溶解于水得终浓度为0.25-1.0mg/mL的虫草素溶液，而后加入1-5g L.casei菌体混匀，置于28-37℃条件下厌氧培养12-72h，即得使虫草素转化为3’-脱氧肌苷。

所述厌氧培养48-72h，即使得98.0％以上的虫草素被转化为3’-脱氧肌苷。

所述L.casie菌体的活菌数为1.0×10⁷—9.9×10⁹cfu/g。

所述L.casei菌体的制备：将干酪乳杆菌按1-20％体积比的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃厌氧条件下培养12-72h，培养菌液于5000-10000rpm离心5-20min，去掉上清，菌体沉淀用无菌生理盐水反复洗涤，离心收集沉淀于4℃保存备用；其中，菌体沉淀用无菌生理盐水洗3次，每次洗涤后由5000-10000rpm×5-20min离心。