[发明专利]一种椎间盘细胞自噬作用的诱导物

说明书

本发明涉及细胞自噬领域，更具体涉及一种诱导椎间盘细胞自噬的诱导物。本发明提供的椎间盘细胞自噬作用的诱导物包括雷帕霉素、氯化锂和硫酸镍。本发明提供的诱导物对椎间盘细胞自噬诱导成功率高，诱导效果稳定，且与传统诱导剂相比，诱导的自噬水平显著提高，极大地提高了本领域技术人员的实验成功率，节省了实验时间。

技术领域

本发明涉及细胞自噬领域，更具体涉及一种诱导椎间盘细胞自噬的诱导物。

背景技术

下腰痛是骨科常见疾患，有研究者统计，一生中有半数以上的人会罹患下腰痛。严重下腰痛可使患者失去工作能力，对社会和家庭造成严重负担。40％以上的下腰痛是由椎间盘退变引起，但是椎间盘退变的确切发病机制尚不明确。关于椎间盘退变机制的研究，以往多集中于形态学和生物化学的改变，认为由于生物力学异常导致椎间盘结构发生改变，或营养功能障碍引起细胞代谢失调，从而最终导致椎间盘发生退行性变。但有学者提出，这些改变都是由椎间盘内细胞的数量和功能发生改变介导的。椎间盘细胞通过分泌细胞外基质(ECM)及其调控因子，调控椎间盘内环境稳态，维持椎间盘正常功能，因此椎间盘内细胞的状态直接影响椎间盘的功能。近年来，一些研究指出，细胞自噬也参与椎间盘退变的发病过程。

自噬是一种存在于胞内的分解代谢途径。机体细胞在体内面临各种压力(Stress)应激，如异常生物力学刺激、营养障碍、生长因子缺乏等。当应激超过细胞承受能力时，细胞启动凋亡机制清除受损细胞；但是应激不足以致死时，细胞启动自噬机制，通过降解胞内受损细胞器，使细胞得以存活。因此，自噬是维持细胞正常功能的一个重要机制。自噬调控异常可导致各类疾病的发生。现已证实，自噬异常上调使得肿瘤细胞在早期营养缺乏环境中得以存活，肿瘤耐药性也可能与自噬引起的细胞耐受有关；在神经系统中，研究发现自噬调控异常可导致Alzheimer，Parkinson，Huntington等疾病发生，敲除自噬相关基因可导致神经发生退行性变；自噬异常还可引起糖尿病等代谢性疾病，以及骨性关节炎等骨科疾病。

相继有研究发现，在不同的椎间盘退变动物模型中有自噬升高的现象；还有研究发现，在体外培养的大鼠椎间盘纤维环(AnnulusFibrosus,AF)和髓核细胞(NucleusPulposus,NP)中，证实营养缺乏(椎间盘退变的诱因之一)可诱导自噬上调，退变的另外诱因之一压力同样可诱导自噬升高。本发明申请人进一步研究发现，如果抑制椎间盘细胞的自噬水平，其细胞凋亡率明显升高。总结现有的自噬研究结果可知，自噬是椎间盘应对退变的一种保护机制，即上调自噬可以治疗或延缓椎间盘退变，其机制是通过抑制细胞凋亡。

雷帕霉素(Rapamycin)是大环内酯类药物，起初是作为抗真菌药物应用。随后发现其可以阻断T淋巴细胞由G1期至S期进程成为肾移植术后一种新型免疫抑制剂。雷帕霉素不只局限于对免疫细胞有作用，它还通过抑制mTOR信号通路，导和促进细胞自噬的发生。最近二十年自噬研究成为热点问题，雷帕霉素作为自噬激活剂再次成为焦点药物。本发明申请人在研究自噬对椎间盘退变的影响时发现，单独使用雷帕霉素对椎间盘细胞的自噬诱导效果并不理想且诱导效果不稳定，使得本领域的研究进展严重受阻。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种对椎间盘细胞自噬诱导效果好，诱导成功率高，诱导效果稳定的诱导物，该诱导物是含有雷帕霉素的组合物。

本发明提供一种椎间盘细胞自噬作用的诱导物，该诱导物包括雷帕霉素、氯化锂和硫酸镍。

进一步地，所述的雷帕霉素的终浓度为50-400nM；

优选地，所述的雷帕霉素的终浓度为50-300nM；

优选地，所述的雷帕霉素的终浓度为50-200nM；

更优选地，所述的雷帕霉素的终浓度为50-150nM。

进一步地，所述的氯化锂的终浓度为5-50mM；

优选地，所述的氯化锂的终浓度为5-40mM；