[发明专利]具有抑制登革病毒复制作用的短肽及其应用

说明书

本发明涉及病毒学领域，具体公开了一种具有抑制登革病毒复制作用的短肽及其应用。本发明所提供的短肽的氨基酸序列为KHGHHRH，即Lys‑His‑Gly‑His‑His‑Arg‑His。所述短肽具有与NS5高特异性的亲和能力，具有高效抑制登革病毒复制的作用，其抗病毒作用不仅限于DENV‑2，对于1型、3型和4型登革病毒的复制也同样具有显著的抑制作用。在该短肽序列的两端各添加1个半胱氨酸，可通过两端的半胱氨酸将短肽环化，形成环肽。所得到的环肽增强了抑制登革病毒复制的作用，可用于登革病毒感染的特异性治疗。

技术领域

本发明涉及病毒学领域，具体地说，涉及采用基因工程和噬菌体展示肽库技术获得的具有抑制登革病毒复制作用的短肽。

背景技术

登革病毒(DENV)可引起登革热、登革出血热和登革休克综合征，广泛流行于热带和亚热带地区，是分布最广、发病最多、危害较大的传染病，在全世界范围内每年约有3.9亿人受感染，近1亿人表现出感染症状，其中大部分为登革热病例，登革出血热病例和登革休克综合症约50多万例，年均因登革病毒感染的死亡数为2万2千多例，以少儿居多(WorldHealth Organization，2009；Bhatt et al.，2013；Guzman and Harris，2015)。登革病毒感染所致的传染病在亚洲、太平洋群岛及中、南美洲许多国家造成严重危害，在我国也已经从输入性、散发性疾病成为常年均有发生的疾病，在台湾、香港和广东等南部地区常年流行，如2014年仅发生于广州的一次流行就有4万病例。

DENV属黄病毒科黄病毒属，分为四个血清型，分别为DENV 1-4，均可对人类造成致病性，其中DENV 2是传播最广泛的血清型，感染后的重症率及病死率也均高于其他型别。美国德克萨斯大学医学中心的病毒学家Nikos等在近年马来西亚的一次登革热流行后，分离一病毒株，并经全基因组测序发现这是一新型的登革病毒，这种马来登革病毒是否会在人群中持续的传播和流行尚不可知(Normile D.2013.Science.342:415)，是否将其定义为DENV 5尚有待探讨。

DENV以雌蚊为传播媒介，主要是埃及伊蚊和白纹伊蚊。雌蚊叮咬DENV感染者后，病毒在蚊体内增殖，再次叮咬人后引起病毒传播和被叮者感染。人群对任何一型DENV的初次感染均较敏感，感染后获得对同型病毒1-4年的免疫力，而对异型病毒的免疫力则很短暂，只维持2-12个月。因而感染一个型别DENV后还可能发生二次或连续感染，而继发异型病毒感染引起登革出血热和登革休克综合征的发病率和病死率更高。这是由于在继发异型病毒感染中预先存在的交叉抗体能够与病毒结合，通过抗体与靶细胞表面的Fc受体的相互作用促进病毒对包括单核细胞、巨噬细胞以及成熟树突状细胞在内的靶细胞的感染性，进而引起血液浓缩、出血或便血甚至休克等临床症状，登革出血热患者在发热阶段与登革热类似，而在退烧后病人体征出现迅速恶化，并出现出血症状，甚至出现低血容量性休克，病程较短但也较为致命，这种二次感染后的抗体依赖的感染增强作用(Antibody dependentenhancement，ADE)是DENV感染致病性的一个特征，也是病毒疫苗研发的主要障碍。因为如果疫苗不能对所有型别的病毒都产生足够的保护性抗体，将会加重异型病毒的感染。而且，一旦有新的型别病毒出现，疫苗也将可能被废弃。因此，法国药企赛诺菲巴斯德在经过几十年的研发后，推出的全球第一支嵌合的登革热四价疫苗于2016年1月在墨西哥和菲律宾等国获许上市不久，其安全性和保护性就被世界卫生组织和已经使用的几个国家共同警示，特别是在儿童中，接种过该疫苗的儿童患上重症登革热的几率反而高于未曾接种过的儿童(WHO，2017；Aguiar et al.，2016；Flasche et al.，2016；Halstead，2016；Halstead andRussell，2016；Wilder-Smith et al.，2016)，人们刚刚看到的曙光随即黯淡。