[发明专利]一种L‑古洛糖的制备方法在审
| 申请号： | 201810024498.3 | 申请日： | 2018-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN107937455A | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 吴旭日;卞柳云;修琪昆;陈依军 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12P19/02 | 分类号： | C12P19/02 |
| 代理公司： | 南京艾普利德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32297 | 代理人： | 张铂 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 古洛糖 制备 方法 | ||
1.一种L-古洛糖的制备方法，其特征在于使用NAD+依赖的甘露醇脱氢酶偶联NADH氧化酶的全细胞生物催化剂催化山梨醇氧化制备稀有己醛糖L-古洛糖。
2.根据权利要求1所述的L-古洛糖制备方法，其特征在于所述的NAD+依赖的甘露醇脱氢酶为来源自Apium graveolens高效突变体，NADH氧化酶来源自Bacillus cereus。
3.根据权利要求1所述的L-古洛糖制备方法，其特征在于催化剂为利用pACYCDuet-1载体共表达甘露醇脱氢酶突变体和NADH氧化酶的大肠杆菌细胞，根据两个酶插入共表达载体pACYCDuet-1前后顺序不同，该全细胞催化剂可以是甘露醇脱氢酶突变体基因mdh位于多克隆位点I，NADH氧化酶基因nox位于多克隆位点II的E. coli (pACYCDuet-mdh-nox) 以及NADH氧化酶基因nox位于多克隆位点I，甘露醇脱氢酶突变体基因mdh位于多克隆位点II的E. coli (pACYCDuet-nox-mdh)。
4.根据权利要求3所述的L-古洛糖制备方法，其特征在于E. coli (pACYCDuet-mdh-nox) 的最佳诱导表达条件为温度20 ℃、诱导剂IPTG 0.75 mM和诱导时间18 小时，E. coli (pACYCDuet-nox-mdh) 的最佳诱导表达条件为温度25℃、诱导剂IPTG 0.5 mM和诱导时间14 小时。
5.根据权利要求3所述的L-古洛糖制备方法，催化山梨醇氧化合成L-古洛糖的优势生物催化剂为E. coli (pACYCDuet-nox-mdh)。
6.根据权利要求1所述的L-古洛糖制备方法，其特征在于反应的pH为5.0-11.0，优选10.0；反应的温度为15-35℃，优选30℃；底物山梨醇的浓度为10-100 mg/ml，优选70 mg/ml，辅底物葡萄糖浓度为7-70 mg/mL，优选28 mg/mL，辅因子FAD浓度为0-100 µM，优选50 µM，反应时间为2-24小时，优选4小时。
7.根据权利要求1所述的L-古洛糖制备方法，其特征在于可用离子交换树脂Dowex® 50WX8-400吸附偶联甲醇--水溶液结晶法制备高纯度L-古洛糖。
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