[发明专利]仿刺参F型凝集素AjFL-1、制备方法及应用

说明书

本发明公开一种仿刺参F型凝集素AjFL‑1，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。制备方法依次按照如下步骤进行：用引物P1和P2对仿刺参F型凝集素AjFL‑1编码区片段进行PCR扩增；将PCR扩增产物与pET‑22b（+）载体经Nde1和Xho1酶切后通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；将上述重组子转入大肠杆菌Transetta（DE3）表达菌株中进行诱导培养，而后纯化、复性，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白。上述仿刺参F型凝集素AjFL‑1可应用于制备抑制毕赤酵母菌药物。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种仿刺参F型凝集素AjFL-1、制备方法及应用。

背景技术

仿刺参(Apostichopus japonicus) 营养价值高及含有多种有效抗癌活性成分，是我国北方黄渤海地区重要的经济海洋水产养殖品种之一。但是，由于海洋环境的日益恶化，高浓度的病原菌导致了海参养殖严重的病害问题，已制约了海参养殖业的健康发展。仿刺参在病害发生的过程中，机体免疫应答关键的第一步是病原和宿主免疫因子之间的识别，因仿刺参不具备获得性免疫系统，缺乏特异性免疫识别分子，因此模式识别分子PRM（Pattern Recognition Molecule）在免疫识别中起着极其重要的作用。F型凝集素是一类含有独特的F型折叠和岩藻糖结合基序的糖识别蛋白，通常也称为岩藻糖凝集素，具有一个CRD结构域。近几年，已在脊椎动物（主要在鱼类）中发现了越来越多的F型凝集素，可以作为免疫识别分子在鱼类免疫防御中扮演着重要角色。但是，迄今为止并没有关于仿刺参F型凝集素、制备方法及在制备抑制毕赤酵母菌药物中应用的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种仿刺参F型凝集素AjFL-1、制备方法及应用。

本发明的技术解决方案是：一种仿刺参F型凝集素AjFL-1，氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

一种上述仿刺参F型凝集素AjFL-1的制备方法，依次按照如下步骤进行：

a. 用引物P1和P2对仿刺参F型凝集素AjFL-1编码区片段进行PCR扩增；

b. 将PCR扩增产物与pET-22b（+）载体经Nde1和Xho1酶切后通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；

c. 将上述重组子转入大肠杆菌Transetta（DE3）表达菌株中进行诱导培养，而后纯化、复性，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白。

一种上述仿刺参F型凝集素AjFL-1在制备抑制毕赤酵母菌药物中的应用。

本发明利用体外重组表达技术获得了仿刺参F型凝集素AjFL-1，该重组蛋白能够优先结合L-岩藻糖，同时在机体外对毕赤酵母菌具有较强的抑制作用，且对不同PAMPs具有广谱性识别作用，在合成岩藻糖探针、制备广谱抗菌药物及免疫增强剂等具有应用价值。

附图说明

图1是本发明实施例重组表达和纯化蛋白电泳图。

图2是本发明实施例仿刺参F型凝集素AjFL-1和不同PAMPs的结合活性示意图。