[发明专利]大鼠臂丛神经损伤保留残根模型的构建及残根的功能评估方法在审
申请号: | 201810027138.9 | 申请日: | 2018-01-11 |
公开(公告)号: | CN107997846A | 公开(公告)日: | 2018-05-08 |
发明(设计)人: | 顾立强;方锦涛;杨建涛;秦本刚;杨羿;何雯婷;李亮;陈刚;涂哲慧;王源远;祝孟海;石恩献 | 申请(专利权)人: | 中山大学附属第一医院 |
主分类号: | A61D1/00 | 分类号: | A61D1/00;A61B10/02;G01N33/48;G01N33/68 |
代理公司: | 广东德而赛律师事务所 44322 | 代理人: | 叶秀进 |
地址: | 510080 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 大鼠 神经 损伤 保留 模型 构建 功能 评估 方法 | ||
1.一种大鼠臂丛神经损伤保留残根模型的构建及残根的功能评估方法,其步骤包括:
大鼠神经残根模型的制作,包括:采用背侧入路,做一个偏右侧的弧形切口,依次切开皮肤和浅层、深层的肌肉,采用小拉钩将右肩胛骨牵开到一侧,从而暴露整个右侧臂丛神经,在显微镜下继续往近端神经根分,直到将5个神经根完全暴露出来;以及模拟临床受伤机制,采用显微止血钳将近端的神经根一一与周围肌肉组织固定,远端采用止血钳对神经根进行牵拉,牵拉后有神经根残根形成;
大体解剖观察;
神经残根取材和组织学评估,包括:检测残根的神经丝蛋白NF-200和髓鞘标志蛋白S-100蛋白的表达量、神经轴突的直径、轴突数量和髓鞘厚度;以及
脊髓取材及组织学评估。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述止血钳通过一根细胶管与砝码连接,所述细胶管通过滑轮传导砝码产生强大的瞬间暴力,所述砝码的重量为1.5kg。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述大体解剖观察步骤包括:
对大鼠进行灌注;
采用背侧入路打开椎板暴露臂从神经残根,所述神经残根的诊断标准为保持结构完整且与脊髓相连接;以及
进行神经残根长度的测量。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述神经残根取材及组织学评估包括:
灌注大鼠取神经残根,一部分残根进行NF200和S100组化染色,检测残根的轴突和施旺细胞的表达情况;以及
另一部分残根进行甲苯胺蓝和电镜检测,检测神经轴突的直径,轴突数量和髓鞘厚度。
5.根据权利要求3-4任意一项所述的方法,其中所述灌注使用的是4%多聚甲醛固定液。
6.根据权利要求4所述的方法,其中所述取神经残根的方法为:切开大鼠背部皮肤,分离肌肉,打开椎板,显露脊髓,分别切取C5-7及C8,T1神经残根,选取最短的神经残根。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述最短的神经残根为C5神经残根。
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