[发明专利]一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法

权利要求书

1.一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)以不同粒径功能化的二氧化硅作为模板，通过疏水性-疏水性作用将其与氧化石墨烯混合:首先将氧化石墨粉末分散到水中并超声4h，再在3000rmp条件下离心30min得到浓度为0.5mg/mL的氧化石墨烯水溶液，然后按照体积比1:3比例将功能化的二氧化硅和氧化石墨烯水溶液在室温下混合12h得到复合材料；

(2)向步骤(1)中得到的复合材料进行-20℃冻干、冷冻干燥，然后在惰性气体中煅烧，再用5wt％的氢氟酸洗，得到石墨烯泡沫；

(3)向步骤(2)中得到的石墨烯泡沫用水分散，通过加入浓度为1mg/mL的盐酸多巴胺溶液对石墨烯泡沫进行功能化修饰：按照体积比为20：1的比例往盐酸多巴胺溶液中加入石墨烯泡沫得到浓度为0.5mg/mL的PNGF纳米复合材料；

(4)取一定量步骤(3)中得到的PNGF纳米复合材料，并将其作为酶纳米反应器放入离心管中，再往里加入活性酶，并在振荡器上混匀，滴在玻碳电极上待用；利用三电极体系即珀丝电极为辅助电极，饱和甘汞电极为参比电极，玻碳电极为工作电极，浓度为0.1M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲液作为电解液，通过计时-电流法每次往电解液中加入内分泌干扰物，用于检测内分泌干扰物。

2.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(1)中功能化的二氧化硅的孔径为60-250nm。

3.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(1)中所述的功能化的二氧化硅的合成方法为：先通过溶胶种子法合成二氧化硅小球；然后用DMDMS作为改性剂，盐酸作为催化剂，将15M盐酸、0.6g聚醚F108、0.875mLDMDMS分别添加到75mL浓度为1mg/mL的二氧化硅小球的水溶液中得到甲基化二氧化硅溶液，再氨水中和甲基化二氧化硅溶液，制得步骤(1)中所述的功能化的二氧化硅。

4.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(2)中的惰性气体为氩气。

5.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(3)中的盐酸多巴胺溶液的制备方法是：将Tris-HCl缓冲溶液与多巴胺混合配制成pH值为6-9的盐酸多巴胺溶液，所述pH优选为8.5。

6.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(4)中加入作为酶纳米反应器的材料为10μL。

7.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(4)中加入活性酶的浓度为10mg/mL，活性酶的量为5μL。

8.根据权利要求1所述的一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，所述步骤(4)中待测内分泌干扰物的浓度为5mM。