[发明专利]一种新型细胞固定剂

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种新型细胞固定剂。采用的技术方案是：将L‑抗坏血酸作为一种新型细胞固定剂，应用于免疫荧光技术。本发明首次报道了L‑抗坏血酸可以作为细胞固定剂对细胞进行固定。经L‑抗坏血酸固定的细胞不仅能完整地保持形态和结构，还可以很好地保存其抗原形态，有利于与相应抗体的进行特异结合。同时，L‑抗坏血酸还可对细胞进行一定的通透处理，固定细胞时不需额外添加细胞通透剂。而且，L‑抗坏血酸本身无毒无害，易溶于水中，配制及使用过程简单、快速、环保，无有毒有害物质产生。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种新型细胞固定剂。

背景技术

免疫荧光技术(Immunofluorescence，IF)是一种基于抗原-抗体反应，以荧光素标记的抗体来追踪细胞内特定抗原(一般为蛋白质)的存在及分布的实验技术，在现代生物学研究领域有着广泛而重要的应用。进行免疫荧光实验时，首先需要将细胞固定，使细胞的蛋白质凝固，终止各种酶促反应，防止细胞自溶或破碎，以保持细胞原有的形态和结构。因此，细胞固定的关键在于：选择合适的细胞固定剂，以保持细胞形态不改变，同时原位保持抗原的三维结构，避免抗原的失活或弥散。

细胞固定剂的种类较多，目前常用的细胞固定剂主要有醛类、醇类等，其中，多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)因其良好的细胞和抗原固定性，在免疫荧光实验中最为常用。但多聚甲醛本身具有一定的毒性，加热时产生的甲醛又会对环境造成污染，对实验人员身体造成伤害。因此，针对免疫荧光实验，急需开发新型无毒无害的高效细胞固定剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型细胞固定剂。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种新型细胞固定剂，其有效成分为L-抗坏血酸。

相应的，L-抗坏血酸在免疫荧光技术中的应用。

优选的，L-抗坏血酸在免疫荧光技术中的应用，包括作为一种细胞固定剂。

优选的，L-抗坏血酸在免疫荧光技术中的应用，还包括作为一种细胞通透剂。

优选的，所述L-抗坏血酸需配制为溶液使用，配制使用溶剂为水或PBS缓冲液或生理盐水。

优选的，所述L-抗坏血酸溶液的浓度为50mM～1M。

优选的，所述L-抗坏血酸溶液的浓度为100mM。

优选的，所述的L-抗坏血酸在免疫荧光技术中的应用，其固定和通透贴壁生长细胞的方法为：取细胞爬片，用PBS清洗细胞；而后用100mM的L-抗坏血酸溶液浸泡细胞爬片，置于室温。

优选的，所述的L-抗坏血酸在免疫荧光技术中的应用，其固定和通透悬浮生长细胞的方法为：收集悬浮细胞，将细胞用PBS重悬，吸取细胞悬液置于清洁载体上，25～45℃自然烘干，再加入100mM的L-抗坏血酸溶液覆盖细胞，置于室温。

优选的，加入的L-抗坏血酸溶液需将待固定细胞完全覆盖。

本发明具有以下有益效果：

1、首次报道了由L-抗坏血酸(L-ascorbic acid,维生素C)配制的溶液可以作为细胞固定剂对细胞进行固定，配制溶液的溶剂可为水、磷酸盐缓冲液(phosphate buffersaline，以下简称PBS)、生理盐水等能溶解L-抗坏血酸，对细胞无毒无害且能帮助维持细胞渗透压的溶液。

2、经L-抗坏血酸固定的细胞不仅能够完整地保持其形态和结构，还可以很好地保存抗原，有利于其与相应抗体的特异结合。

3、L-抗坏血酸在对细胞进行固定的同时，还可改善细胞膜的通透性，对细胞进行一定的通透处理，无需像其它常规细胞固定剂一样，额外添加细胞通透剂。