[发明专利]一种多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物应用技术领域，具体涉及一种多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用。

背景技术

皮肤恶性黑色素瘤(恶黑)是皮肤癌中恶性程度最高的肿瘤。好发于白种人，在我国，恶黑的发病率相对较低，但是发病率增长较快。随着老龄化社会的到来，有的学者甚至提出，未来十年恶性黑色素瘤将成为影响公众健康的重要问题。由于地域及生活习惯等因素，光线性皮肤病、皮肤慢性损伤等在云南省较为常见，而恶黑的发生机率也相对较高。

基于恶性黑色素瘤的免疫原性特性，免疫治疗已经成为一种治疗晚期恶性黑色素瘤的重要辅助治疗方案。IL-15是一种四螺旋束细胞因子，并且他们的异三聚体受体，除了α链以外，β和γ链共用；这些自身结构的相似及部份受体的共用，IL-15的功能主要有刺激NK细胞、T细胞、B细胞的增殖与活化等等。在肿瘤免疫治疗方面，IL-15可以通过激活效应T细胞，记忆CD8+T细胞和NK细胞而发挥显著的抑瘤作用。由于快速的肾脏清除，要达到有效治疗剂量，仍然需要大剂量的重复注射IL-15细胞因子，由这种冲击疗法引起的毒副作用及费用昂贵等问题也限制着其广泛的临床应用。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，本发明其中的克服现有技术中存在的不足，提供一种多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用，其中，所述多聚阳离子载体为由环糊精、聚乙烯亚胺叶酸聚合而成的多聚阳离子，所述抗肿瘤基因药物为重组腺病毒上转导了人源白介素15的基因药物。

作为本发明所述多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用的优选方案，其中，所述重组腺病毒为由体外重组产生的腺病毒载体，包括血清型2和血清型5。

作为本发明所述多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用的优选方案，其中，所述肿瘤为黑色素瘤。

作为本发明所述多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用的优选方案，其中，将所述的多聚阳离子和所述腺病毒按70nmol：2×10⁶pfu比例混合形成聚合物。

作为本发明所述多聚阳离子载体包被重组腺病毒在制备抗肿瘤基因药物中的应用的优选方案，其中，所述的基因药物，其作用方式是人源白介素15基因的表达。

本发明的有益效果：

本发明研究发现，在皮下及转移性恶性黑色素瘤小鼠模型上，转导了人源白介素15的多聚阳离子载体包被重组腺病毒(以下称为H1/rAdv-15)，能有效抑制肿瘤生长，延长荷瘤鼠存活时间，其疗效优于单独的转导了人源白介素15的重组腺病毒(以下称为Adv-IL15)。

我们进一步发现，H1/rAdv-15的抗肿瘤机制主要是：激活CD4+,CD8+T细胞和NK细胞的增殖、刺激其杀伤活性，抑制免疫抑制细胞Treg而发挥其抗肿瘤活性，为恶性黑色素瘤的免疫治疗研究提供新思路。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：

图1为H1结构示意图。

图2为NMR表征H的结构图。

图3为H1/Adv-IL15包装比例筛选结果图。

图4为B16细胞IL15表达结果图。

图5为皮下肿瘤模型肿瘤生长情况图。

图6为皮下肿瘤荷瘤鼠生存时间图。

图7为转移肿瘤模型小鼠肺部肿瘤生长图。

图8为转移肿瘤模型小鼠生存情况图。

图9为CD4+T细胞计数图。

图10为CD4+T细胞代表性流式细胞分析柱状图。

图11为CD8+T细胞计数图。

图12为CD8+T细胞代表性流式细胞分析柱状图。

图13为NK细胞细胞计数图。

图14为NK细胞细胞代表性流式细胞分析柱状图。