[发明专利]一种与骨肉瘤相关的分子标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种与骨肉瘤相关的基因及其应用，具体的所述基因为AWAT2。

背景技术

骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤，起源于可分泌骨基质或类骨质的间质细胞，好发于青少年，恶性程度高，常由于早期的骨转移而导致患者死亡，5年死亡率常高达80％以上。随着手术技术的提高、化疗药物的发展及新辅助化疗的应用，骨肉瘤的综合治疗效果及预后得到了明显的改善，五年生存率可高达60％以上，在某些先进的肿瘤治疗中心甚至可以达到80％以上，病人的生存质量也随着保肢手术的发展而得到了很大的提高。新辅助化疗强调了化疗药物的应用，因为术前化疗不仅能缩小既发肿瘤大小，为手术创造条件，又能消灭潜在的转移病灶，减少患者远处转移机率。然而，大剂量化疗药物的毒性反应给病人带来了极大的痛苦，病人生存质量欠佳。同时肿瘤细胞的耐药性也给骨肉瘤的后续治疗带来了极大的不稳定性。了解肿瘤骨生长及重建方面的分子生物学的机制，寻求更好地化疗药物或者生物抑制剂是进一步提高骨肉瘤治疗效果的关键。

新型基因靶向治疗方法是目前较为先进的生物疗法，针对不同肿瘤个体实现针对性的治疗，是目前肿瘤治疗的重要手段之一。RNA干扰(RNAi是一种内在基因沉默技术，shRNA(short hairpin RNA)又名短发夹RNA，是一种可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA(siRNA)的DNA分子，可以诱发同源mRNA高效特异性的降解，目前已成为基因研究、癌症、家族遗传性疾病和传染病等重要手段。如专利201510075917.2、201510075920.4、201510075918.7、201510075919.1中就公开了与骨肉瘤发生发展相关的基因标志物，并通过体外干扰基因的表达水平来验证了基因可用于骨肉瘤的治疗。尽管现有技术中已经报道了部分基因与疾病的关系，但是远远不能满足临床骨肉瘤诊断和治疗的需要，还需要挖掘新的与骨肉瘤相关的有效基因作为标志物应用于临床。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种与骨肉瘤发生发展相关的基因，通过检测样本中该基因的表达水平，可以判断患者是否患有骨肉瘤或者患骨肉瘤的风险的大小，通过靶向于该基因，改变该基因的表达水平或活性，可以实现骨肉瘤患者的精准靶向治疗。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了检测AWAT2表达水平的试剂在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用。

进一步，所述试剂包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片技术检测AWAT2表达水平用试剂。

进一步，所述试剂包括针对AWAT2基因的引物和/或探针，或针对AWAT2蛋白的抗体和/或配体。

本发明提供了一种诊断骨肉瘤的产品，所述产品包括样本中检测AWAT2表达水平的芯片、制剂或试剂盒。

进一步，所述试剂盒包括至少一对特异性扩增AWAT2基因的引物；优选的，所述引物具有SEQ ID NO.1～2所示的序列。

本发明提供了AWAT2在筛选预防或治疗骨肉瘤的候选化合物中的应用。

进一步，筛选候选化合物的步骤如下：

用候选物质处理表达或含有AWAT2基因或其编码的蛋白的体系；和

检测所述体系中AWAT2基因或其编码的蛋白的表达或活性；

其中，若所述候选物质可降低AWAT2基因或其编码的蛋白的表达或活性优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗骨肉瘤的候选化合物。

在本发明中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选化合物包括(但不限于)：针对AWAT2基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物。

在本发明中，所述的步骤还包括：对获得的候选化合物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选化合物中进一步选择和确定对于预防、缓解或治疗骨肉瘤有用的物质。