[发明专利]一种壳寡糖接枝共聚物G2.0及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种壳寡糖接枝共聚物G2.0，其特征在于其分子式如下：

其中n为任意整数值； 其具体的制备方法如下：

1)称取一定量的壳聚糖通过高速搅拌使其充分溶解于一定量的1％(v/v)乙酸溶液中，然后将溶液转移至石英三颈瓶内，添加一定量的30％(v/v)H₂O₂,正确安装于微波合成仪腔体内，注意一定要使超声波探头没到溶液的界面以下；设置微波功率300w，反应30min,打开紫外灯光照进行辅助降解，待实验结束，将溶液在40℃度下水浴旋蒸浓缩，然后进行冷冻干燥24h，即可得到粘均分子量M_η在25000左右的壳低聚糖样品；上述乙酸加入量与壳聚糖的总量关系如下：每3g壳聚糖加入100mL上述乙酸溶液，H₂O₂加入量与壳聚糖的总量关系如下：每1g壳聚糖加入0.1mL30％H₂O₂；

2)按照质量比为1：1：1的比例称取一定量的木瓜蛋白酶、果胶酶和纤维素酶溶于pH＝5.5的HAC-NaAC的缓冲溶液中，配制成1mg/mL的酶液，待用；将上述经微波降解后的壳低聚糖溶液的pH调节至5.5，按照酶与底物的浓度之比为1：10，加入上述待用酶液，搅拌均匀，并置于45℃的恒温水浴槽中酶解4h；完成后煮沸加热10min使酶灭活，40℃下减压蒸馏浓缩得到制备所需的反应原料壳寡糖样品溶液；

3)反应原料壳寡糖的制备步骤还包括对制备所得的壳寡糖粉末进行分子量分级，选取分子量为3500-7000的壳寡糖作为原料；具体分级方法如下：分别选取直径为25mm截留分子量7000和直径34mm截留分子量为3500的透析袋进行前处理，去除金属离子；将直径较小的透析袋套入直径较大的透析袋中，其中一端用透析袋夹固定，蒸馏水冲洗干净，然后用5mL的移液枪移取步骤 2 ） 制备的壳寡糖样品溶液装入里层透析袋内，蒸馏水填充双层透析袋之间的间隙，透析袋夹封口，然后放入装有蒸馏水的大烧杯中透析5d；透析完成后将双层膜间隙的液体取出，冷冻干燥，即可得到特定分子量的反应原料壳寡糖；

4)称取一定量的壳寡糖，加入1％(v/v)乙酸作为反应溶剂；乙酸加入量与壳寡糖的总量关系如下：每1g壳寡糖中加入上述乙酸25ml；充分溶解，向瓶内通入氮气移除氧气；在氮气保护下加入一定量的硝酸铈铵作为引发剂，引发剂的加入量与壳寡糖的质量比为1.6:1-2.5:1；然后缓慢地逐滴加入适量丙烯酸甲酯；上述壳寡糖和丙烯酸甲酯的反应摩尔比为1：8—1：8.5；设置搅拌速度为200rpm,40℃—55℃温度下连续反应8h—10h；待反应完成后，将反应所得物G0.5滤出，接着将滤出的反应所得物G0.5先用反应溶剂1％(v/v)乙酸抽滤3次，再依次丙酮、乙醚、无水乙醇反复冲洗3次，除去未反应的丙烯酸甲酯，最后放入50℃真空干燥箱烘干备用；

5)称取上述步骤制得备用的G0.5，加入色谱级的甲醇溶剂浸泡12h，甲醇的加入量与G0.5的总量关系如下：每1mg G0.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反应温度为20℃，逐滴加入分析纯乙二胺：乙二胺的加入量与G0.5的总量关系如下：每1mg G0.5加入乙二胺0.08mL；N₂保护下反应8h；待反应完成后，将反应所得物G1.0滤出，用反应溶剂甲醇冲洗3遍，然后再依次用无水乙醇、蒸馏水反复洗涤3次，置于50℃真空干燥备用；

6)称取步骤5)所得G1.0置于三颈烧瓶中，加入色谱级甲醇溶剂浸泡12h，甲醇的加入量与G1.0的总量关系如下：每1mg G1.0中加入上述甲醇0.4ml；然后在氮气保护下逐滴加入丙烯酸甲酯，丙烯酸甲酯的加入量与G1.0的总量关系如下：每1mg G1.0中加入上述丙烯酸甲酯0.1ml；在45℃下连续反应8h后，滤出G1.5，按照G0.5的洗涤方法纯化样品，置于50℃真空干燥箱干燥备用；

7)称取上述步骤制得备用的G1.5，加入色谱级甲醇溶剂浸泡12h，甲醇的加入量与G1.5的总量关系如下：每1mg G1.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反应温度为20℃，逐滴加入分析纯乙二胺：乙二胺的加入量与G1.5的总量关系如下：每1mg G1.5加入乙二胺0.08mL；N₂保护下反应8h；待反应完成后，将反应所得物G2.0滤出，用反应溶剂甲醇冲洗3遍，然后再依次用无水乙醇、蒸馏水反复洗涤3次，置于50℃真空干燥即得。