[发明专利]一种发酵生产L-丙氨酸的大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 201810033876.4 | 申请日： | 2018-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN108060114B | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 齐俊平;张帆;刘佳;刘立明 | 申请（专利权）人： | 金华利家园生物工程有限公司;江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 321000 浙江省金*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 发酵 生产 丙氨酸 大肠杆菌 及其 应用 | ||
1.一种大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌重组菌是通过在能够产富马酸的大肠杆菌中，过表达天冬氨酸酶AspA和L-天冬氨酸-β-脱羧酶AsD；所述天冬氨酸酶AspA和L-天冬氨酸-β-脱羧酶AsD通过核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的RBS1相连接；通过pEtac质粒串联表达所述天冬氨酸酶AspA和L-天冬氨酸-β-脱羧酶AsD；所述大肠杆菌重组菌在L-丙氨酸转运蛋白AlaE编码基因YgaW上游整合了组成型启动子J23119。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述天冬氨酸酶AspA编码基因aspA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述L-天冬氨酸-β-脱羧酶AsD编码基因asD的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述产富马酸的大肠杆菌为大肠杆菌CICC.23846。
4.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述L-丙氨酸转运蛋白AlaE编码基因YgaW的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.一种利用权利要求1所述的大肠杆菌重组菌发酵生产L-丙氨酸的方法，其特征在于，所述方法具体是：将摇瓶种子3～5％接种量接种于发酵培养基，稀硫酸和氨水控制pH在6.8～7.2，通气量0.1～1vvm，温度34～36℃，搅拌80～120rpm，当OD600达到10～15时，加入2～3g/L乳糖诱导天冬氨酸酶和L-天冬氨酸-β-脱羧酶的表达，发酵过程当葡萄糖浓度低于10～15g/L时，补加500～700g/L葡萄糖溶液，每升发酵液补加20～40g葡萄糖，共补加2～6次，当葡萄糖消耗尽后结束发酵。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵培养基成分为：初始葡萄糖60～80g/L，酵母粉4～6g/L，胰蛋白胨1～3g/L，(NH4)2SO4 1～3g/L，K2HPO4·12H2O 3～5g/L，KH2PO4 3～5g/L，MgSO4·7H2O 0.4～0.6g/L，一水合柠檬酸0.2～0.4g/L，MnCl2·4H2O 0.06～0.1g/L。
7.权利要求1所述的大肠杆菌重组菌在生产L-丙氨酸中的应用。
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