[发明专利]一种抗鸡CAR1蛋白的多克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明提供一种抗鸡CAR1蛋白多克隆抗体及其制备方法，包括鸡tvb基因的提取、克隆、原核表达及免疫。禽白血病作为由禽白血病病毒(ALV)引起的一类导致禽类产生肿瘤的主要疫病之一，每年给世界家禽产业造成了巨大损失。其中禽白血病病毒(ALV)的B亚型禽白血病病毒的受体蛋白为死亡受体CAR1蛋白，目前市面上只有针对人CAR1蛋白的DR4和DR5抗体，由于种属差异性此类抗体对鸡的CAR1蛋白不具有特异性，不能准确识别鸡CAR1蛋白。本发明通过对鸡tvb基因的提取、克隆和原核表达，有效制备大量的重组蛋白GST‑TvbS1，进而利用其作为抗原制备抗鸡CAR1蛋白的多克隆抗体，使多克隆抗体对鸡CAR1蛋白具有高度特异性。

技术领域

本发明涉及一种抗CAR1蛋白多克隆抗体，特别是涉及一种抗鸡CAR1蛋白的多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

禽白血病作为由禽白血病病毒(ALV)引起的一类导致禽类产生肿瘤的主要疫病之一，每年给世界家禽产业造成了巨大损失。根据病毒囊膜糖蛋白的抗原结构、病毒宿主范围及在细胞培养上不同毒株之间的相互干扰作用的不同，将ALV分为A～J 10个亚型，其中A、B、C、D、E 和J6个亚型存在于鸡中，而A亚型禽白血病病毒、B亚型禽自血病病毒和J亚型禽白血病病毒的感染最为常见。ALV通过与宿主特异性受体的结合及融合感染细胞致病。ALV受体蛋白的突变与ALV感染敏感性紧密相关，解析ALV受体蛋白有利于研发ALV抗病育种方法。B亚型禽白血病病毒的受体蛋白为死亡受体CAR1蛋白，由鸡tvb基因编码表达而成。虽然市面上有针对人CAR1蛋白的DR4和DR5抗体，由于种属差异性此类抗体对鸡的CAR1蛋白不具有特异性，不能准确识别鸡CAR1蛋白。由于目前尚未出现针对鸡CAR1蛋白具有高特异性的抗体，考虑通过基因克隆和表达来获取重组蛋白，制备具有高特异性的抗鸡CAR1蛋白抗体，用于准确识别、捕获或封闭B亚型受体蛋白，有利于深入研究该受体蛋白和ALV抗病育种方法。

发明内容

本发明提供了一种抗鸡CAR1蛋白的多克隆抗体及其制备方法，以解决现有技术中针对鸡 CAR1蛋白缺少高度特异性抗体的问题。

本发明目地在于提供一种抗鸡CAR1蛋白多克隆抗体，所述多克隆抗体由经重组质粒 pGEX-4T-2-TvbS1编码表达的重组蛋白GST-TvbS1经生物免疫制得，所述重组质粒pGEX-4T-2-TvbS1的编码基因序列包括序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

进一步地，所述重组蛋白GST-TvbS1由保藏号为GDMCC60225的大肠杆菌菌株BL21制备而成。

本发明的另一目地在于提供一种上述抗鸡CAR1蛋白多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：提取鸡tvb基因；

步骤二：构建原核表达载体重组蛋白GST-TvbS1；

步骤三：使用重组蛋白GST-TvbS1对大肠杆菌细胞进行感受态转化，制备工程菌；

步骤四：诱导工程菌进行重组蛋白GST-TvbS1的表达，并进行纯化；

步骤五：使用重组蛋白GST-TvbS1或包括重组蛋白GST-TvbS1的组合物对哺乳动物进行免疫，制备多克隆抗体。

进一步地，所述步骤一中提取鸡tvb基因的方法如下：

从7～9日龄鸡胚中分离胚胎成纤维细胞，使用Trizol抽提纤维细胞的RNA，使用1％琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离纯化，得到可用于表达鸡CAR1蛋白的RNA；对所得RNA进行反转录，得到具有鸡tvb基因的cDNA，所述具有鸡tvb基因的cDNA序列为SEQ ID NO.1。

更进一步地，所述步骤二中构建原核表达载体重组蛋白GST-TvbS1的方法如下：